Caracterização de Laccase secretada por Thelephora terrestris

Abstract

Resumo: O fungo ectomicorrízico Thelephora terrestris, nas condições estudadas, sintetiza duas laccases, das quais uma é preferencialmente secretada. A isoforma extracelular foi caracterizada utilizando seringaldazina como substrato. A atividade máxima foi obtida à temperatura de 45°C, exibindo uma variação do pH ótimo, dependente do substrato empregado, o qual corresponde 5,0; 4,8 e 3,4 para a oxidação da seringaldazina, guaiacol e ABTS, respectivamente. A enzima é inespecífica, com valores de Km de 2,52 ± 0,47; 16,1 ± 1,9 e 120,6 ± 4,9 nM para a seringaldazina, ABTS e guaiacol, respectivamente. A exolaccase é instável ao congelamento perdendo 50% de atividade em 8 dias. Quando a enzima é exposta a temperatura de 70°C, 50% da capacidade de catálise é perdida em 25 minutos. A análise do estudo de inibidores demonstra que a exolaccase foi 100% inibida por pmercaptoetanol 1 mM e L-cisteína 1 mM, entretanto foi ativada por PCMB 1 mM. Azida sódica 0,1 mM e dietilditiocarbamato 7,5 mM inibiram completamente a enzima e 50% de inibição foi observada quando a enzima foi tratada com 8- hidroxiquinolina 1 mM. Não houve variação dos níveis de exolaccase, considerando a variação da massa micelial, quando a concentração de glucose no meio foi aumentada de 0,36 a 1%. Em contraste a produção da exolaccase aumentou proporcionalmente a concentrações crescentes de fosfato de amônio de 0,25 a 3,7 mM. Os maiores níveis de exolaccase por massa micelial foram obtidos em culturas estacionárias em relação as culturas desenvolvidas sob agitação