Aplicação do princípio

Abstract

Resumo: A dermatite atópica canina é caracterizada pela exacerbação da inflamação e prurido e é comumente tratada com Oclacitinibe (OCLA), um inibidor seletivo das enzimas Janus quinases 1 e 2. Desenvolver o método indicativo de estabilidade é essencial para avaliar a estabilidade de OCLA. O objetivo com este trabalho foi desenvolver e validar um método indicativo de estabilidade simples, rápido e sensível utilizando cromatografia líquida de alta eficiência acoplado ao detector de arranjo diodo (CLAEDAD) para determinação do OCLA, aplicando a abordagem Analytical Quality by Design (AQbD). Para isso, o OCLA foi exposto a diferentes condições de estresses (ácida, alcalina, neutra, fotolítica, oxidativa e térmica). O monitoramento dos produtos de degradação (PDs) foi feito por CLAE-DAD, avaliando o aparecimento de novos picos cromatográficos ou a modificação na intensidade do sinal cromatográfico do OCLA. Para desenvolver e otimizar o método foram conduzidas as seguintes etapas. Definição objetivos através de perfil do alvo analítico, identificação dos atributos e parâmetros críticos do método, análise de riscos foi feita através do digrama de Ishikawa e análise de modo e falha de efeitos, o desenho experimental foi realizado através do software Design Expert versão 11.1 e foi executado utilizando um cromatógrafo Agilent serie 1100. O método foi validado de conforme ANVISA e ICH. Apenas as condições de estresse ácida e fotolítica houve formação de PDs, sendo detectado oito PDs. Foram gerados três modelos sendo dois quadráticos e um cúbico com valores de ANOVA p< 0,05 e falta de ajuste p> 0,05, para pureza de OCLA, tempo de retenção do último pico e fator caudal de OCLA, respectivamente. Conforme o gráfico de overlay plot foram definidos os parâmetros cromatográficos como temperatura do forno de 41 ºC, taxa de fluxo de 1,2 mL.min-1, a fase móvel constituída por água contendo 0,1% de ácido fórmico com pH de 2,5 (ajustado com 0,1% de ácido clorídrico), volume de injeção de 12 MiL, utilizando eluição por gradiente (0.0 min 5% B; 0.0 - 6.7 min 27% B, 6.8 - 10 min 27%B, 10 min 5%B) de água contendo 0,1 % de ácido fórmico. Considerando fator caudal, resolução, eficiência cromatográfica. O método validado foi seletivo, sensível, linear (r> 0,999), preciso e exato (DPR< 3), com a recuperação encontrada entre 97,97 a 98,36%, respectivamente, e tendo como limite de detecção e de quantificação de 10,89 e 33,01 Mig.mL-1, respectivamente. A partir desses resultados, é possível afirmar que o método desenvolvido se mostrou adequado para a quantificação do OCLA na presença de seus excipientes e PDs.

Abstract: Canine atopic dermatitis is characterized by exacerbation of inflammation and pruritus and is commonly treated with Oclacitinib (OCLA), a selective inhibitor of the enzymes Janus kinases 1 and 2. Developing the stability-indicating method is essential to assess the stability of OCLA. The objective of this work was to develop and validate a simple, fast and sensitive indicative method of stability using high performance liquid chromatography coupled to a diode array detector (HPLC-DAD) for the determination of OCLA, applying the Analytical Quality by Design (AQbD) approach. For this, OCLA was exposed to different stress conditions (acidic, alkaline, neutral, photolytic, oxidative and thermal). The monitoring of degradation products (DPs) was performed by HPLC-DAD, evaluating the appearance of new chromatographic peaks or the modification in the intensity of the OCLA chromatographic signal. To develop and optimize the method, the following steps were carried out. Objective definition through analytical target profile, identification of critical attributes and parameters of the method, risk analysis was performed using the Ishikawa diagram and mode and failure effects analysis, the experimental design was performed using Design Expert software version 11.1 and was performed using an Agilent 1100 series chromatograph. The method has been validated according to ANVISA and ICH. Only under acidic and photolytic stress conditions there was formation of PDs, being detected eight PDs. Three models were generated, two quadratic and one cubic with ANOVA values p<0.05 and lack of fit p>0.05, for OCLA purity, last peak retention time and OCLA flow rate, respectively. According to the overlay plot, the chromatographic parameters were defined as oven temperature of 41 ºC, flow rate of 1.2 mL.min-1, the mobile phase consisting of water containing 0.1% formic acid with a pH of 2 .5 (adjusted with 0.1% hydrochloric acid), 12 MiL injection volume, using gradient elution (0.0 min 5% B; 0.0 - 6.7 min 27% B, 6.8 - 10 min 27%B, 10 min 5%B) of water containing 0.1% formic acid. Considering flow rate, resolution, chromatographic efficiency. The validated method was selective, sensitive, linear (r> 0.999), precise and exact (RSD < 3), with recovery found between 97.97 to 98.36%, respectively, and having as detection and quantification limit of 10.89 and 33.01 Mig.mL-1, respectively. From these results, it is possible to affirm that the developed method proved to be adequate for the quantification of OCLA in the presence of its excipients and DPs.