Conjugação e transformação por eletroporação de Herbaspirillum seropedicae estirpes Z78, Z152 e ZA95

Abstract

Resumo: Eletroporação e conjugação foram utilizadas para a transferência dos plasmídeos R68.45, pCK3, pVK102 e pBMR5 para Herbaspirillum seropedicae estirpes Z78, Z152 e ZA95. Vários parâmetros que afetam estas transferências foram investigados utilizando culturas na fase exponencial de crescimento (D.O.550nm?1,0). Foi estabelecido um protocolo que permitiu a obtenção de frequências de conjugação da ordem de 10-5 a 10-7. A eletrotransformação, como técnica alternativa resultou em eficiências da ordem de 10³ transformantes/yg de DNA. As condições de eletroporação estabelecidas mostraram maiores números de transformantes/mL quando da utilização de campo elétrico de 8 kV.cm-1 e pulso de 6ms. Intensidades menores de campo elétrico resultaram em maior número de células viáveis, porém reduziram a eficiência das eletrotransformações.