Efeitos da toxina recombinante LiRecDT - componente do veneno da aranha marrom - Loxosceles intermedia Mello Leitao, 1934 (Araneae, Sicariidae) - sobre o metabolismo oxidativo de mitocôndrias isoladas do córtex de rim de rato

Abstract

Resumo : No sul do Brasil, o Loxoscelismo tem mostrado ser importante particularmente no Estado do Paraná. Os mecanismos que respondem pelo efeito dermonecrótico do veneno da aranha marrom são ainda inconclusivos devido a sua grande complexidade química e as inúmeras ações tóxicas dos seus componentes. O veneno da aranha marrom é uma mistura homogênea de toxinas protéicas com diferentes massas moleculares. Algumas destas têm sido identificadas e bioquimicamente bem caracterizadas, incluindo a fosfatase alcalina, fosfohidrolase ribonucleotídeo, hialuronidase, serinoproteases, metaloproteases e esfingomielinase-D. O objetivo deste trabalho foi investigar o potencial de toxicidade da proteína recombinante LiRecOT, obtida por clonagem molecular a partir da glândula de veneno da aranha marrom, sobre os parâmetros do metabolismo oxidativo mitocondrial do córtex renal de rato. Mitocôndrias deste tecido foram isoladas seguindo o método de VOSS et aI. (1987), com algumas modificações. Para análises polarográficas do consumo de oxigênio na preparação de mitocôndrias isoladas, os experimentos foram realizados em volume final de 1.3 ml, sob agitação constante em câmara termostatizada a 28°C. Foi determinada a atividade ATPásica em mitocôndrias intactas, assim como investigadas as atividades enzimáticas mitocondriais, a saber, NADH oxidase e Succinato oxidase. Os parâmetros avaliados foram: velocidade respiratória na presença de ADP (estado 111), velocidade respiratória após o consumo de ADP (estado IV), a razão ADP/O e o Coeficiente de Controle Respiratório (RC). Com a finalidade de padronizar o tempo de incubação da preparação mitocondrial com a LiRecOT, foi desenvolvido um estudo de cinética de consumo de oxigênio sob diferentes tempos de incubação, sendo escolhido o tempo de 6 minutos. Os experimentos que avaliaram o efeito de diferentes concentrações da toxina sobre a velocidade respiratória mitocondrial, mostraram efeito inibidor do estado 111 para as três concentrações utilizadas. Esta resposta sugere várias possibilidades de mecanismos de ação desta toxina, como a inibição dos complexos enzimáticos da cadeia respiratória, inibição das desidrogenases do substrato ou ainda inibição da atividade do translocador de nucleotfdeos da adenina. A atividade da enzima Succinato oxidase não sofreu inibição significativa, já para a NADH oxidase observou-se discreta inibição, indicando que a LiRecOT possa atuar sobre o complexo I da cadeia respiratória mitocondrial. Embora os experimentos de mensuração da atividade da enzima ATPase não tenham mostrado diferenças estatisticamente significativas, os resultados obtidos na presença da toxina LiRecOT mostraram uma tendência de estímulo da atividade hidrolítica da enzima. Esse efeito poderia interferir na produção de ATP, ocasionando um aumento da osmolaridade celular, dependente da retenção do sódio, levando a formação de edema celular. Esta situação pode acarretar prejuízos para os mecanismos fisiológicos que respondem pelo transporte de eletrólitos pelo néfron e contribuir para a instalação da insuficiência renal, como já demonstrado ocorrer em humanos e em animais de experimentação.