dc.contributor.advisor | Chubatsu, Leda Satie, 1966- | pt_BR |
dc.contributor.author | Araújo, Luíza Maria de | pt_BR |
dc.contributor.other | Pedrosa, Fabio O., 1947- | pt_BR |
dc.contributor.other | Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Curso de Graduação em Ciências Biológicas | pt_BR |
dc.date.accessioned | 2022-09-01T18:00:48Z | |
dc.date.available | 2022-09-01T18:00:48Z | |
dc.date.issued | 2000 | pt_BR |
dc.identifier.uri | https://hdl.handle.net/1884/32285 | |
dc.description | Orientadores: Leda Satie Chubatsu e Fábio de Oliveira Pedrosa | pt_BR |
dc.description | Monografia (Bacharelado) - Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciencias Biológicas. Curso de Graduaçao em Ciencias Biológicas | pt_BR |
dc.description.abstract | Resumo : Azospirillum brasilense é um microrganismo, diazotrofo, endofítico facultativo, encontrado em associação com inúmeras plantas de importância agrícola. O processo de fixação do nitrogênio envolve um alto gasto energético, sendo altamente regulado tanto a nível da síntese do complexo enzimático nitrogenase, quanto a nível de sua atividade. A proteína PII (GinS), produto do gene glnB, é uma das proteínas envolvidas na cascata de regulação da fixação de nitrogênio. Esta proteína é responsável pelo sensoriamento dos níveis de nitrogênio intracelular. O gene glnB de Azospirillum brasilense foi clonado a partir da amplificação por peR utilizando como molde o DNA genômico deste organismo e oligonucleotídeos sintetizados quimicamente. A seqüência de bases desses oligonucleotídeos foi baseada naquela depositada no banco de dados GENSANK. O fragmento amplificado de 369 pb foi clonado e sequenciado nos vetores de expressão pET28a e pT7-7 entre os sítios Ndel e BamHI e no vetor pTZ19R entre os sítios Xbal e Hindlll, originando os plasmídeos pLMA-MLV1 pLMA-4 e pLMA-2, respectivamente. Após crescimento e indução com IPTG ou lactose, a proteína PII foi superexpressa. O plasmídeo pLMA-MLV1 expressou a proteína PII como uma fusão a uma sequência contendo 6 histidinas (His-Tag) enquanto o plasmídeo pLMA-4 expressou a proteína PII nativa. A taxa de migração das proteínas em gel de poliacrilamida-SDS foi do tamanho esperado, 15 kDa para a proteína PII-His e 13 kDa para a proteína PII nativa. Ambas as proteínas, PII nativa e PII-His, foram superexpressas e encontradas solúveis. | pt_BR |
dc.format.extent | 1 recurso online : PDF. | pt_BR |
dc.format.mimetype | application/pdf | pt_BR |
dc.language | Português | pt_BR |
dc.subject | Azospirillum brasilense | pt_BR |
dc.title | Clonagem e expressao do gene GinB de Azospirillum brasilense | pt_BR |
dc.type | Monografia Graduação Digital | pt_BR |