Sequenciamento e análise de regiões genômicas de Azospirillum brasilense

Abstract

Resumo : As bactérias do gênero Azospirillum são encontradas associadas à raízes de gramíneas de interesse comercial como milho, trigo, arroz e sorgo. São aeróbias e diazotróficas, ou seja, capazes de utilizar N2 atmosférico como fonte única de nitrogênio, reduzindo o N2 a NH4 + sob condições de baixo oxigênio. Este processo, conhecido como fixação biológica de nitrogênio é altamente regulado por um complexo mecanismo em cascata, o sistema Ntr. Em A. brasilense a proteína PII, produto do gene glnB, funciona como sensor dos níveis de amônio intracelular controlando a atividade de NifA, proteína responsável pela ativação dos genes envolvidos na síntese do complexo da nitrogenase. A proteína glutamina sintetase, que também faz parte do sistema Ntr, é codificada pelo gene glnA e converte amônio a glutamina. O plasmídeo pAB441 foi isolado de um banco genômico de Azospirillum brasilense, apresentando um inserto de 20 Kb. Este plasmídeo contém o operon glnBA e estudos de complementação genética de mutantes de A. brasilense, feitos por Vitorino e colaboradores (2001), sugerem que pode conter outros genes cujo produto participa da regulação da fixação de nitrogênio. O objetivo deste trabalho é identificar estes genes a partir da subclonagem de um fragmento de seqüência desconhecida de aproximadamente 5,0 kb do pAB441 e posterior seqüenciamento. Os resultados permitiram a identificação de cinco genes que codificam para proteínas envolvidas na resposta a choque térmico por frio, são elas: fator "trigger", ClpP, ClpX, protease Lon e HUß. O gene que codifica para a subunidade ß da NADH-desidrogenase também foi identificado à jusante do gene para HU. Neste trabalho, nenhum gene diretamente envolvido com o metabolismo de nitrogênio foi identificado.