Revisão bibliográfica do sistema de duplo-híbrido em leveduras e sua variações e aplicação experimental do sistema de duplo-híbrido clássico

Abstract

Resumo : O sistema de duplo-híbrido em leveduras é um engenhoso ensaio genético criado em leveduras para detectar interações entre proteínas. Esta técnica tem se tornado cada vez mais popular no estudo de interatomas devido às muitas vantagens que ela apresenta como a capacidade de reportar interações proteicas in vivo, fácil implementação, custos relativamente baixos e, principalmente, a possibilidade de análises em larga escala onde podem ser feitas varreduras de busca por possíveis interações mesmo que os componentes que interagem com uma determinada proteína alvo não sejam conhecidos. Entretanto, apesar de abrir inúmeras possibilidades, esta técnica também apresenta algumas limitações que dificultam o seu uso. Mas ainda assim, as vantagens desta abordagem inspiram cada vez mais pesquisadores a utilizarem o duplo-híbrido e buscarem estratégias que superem as limitações deste sistema. Pensando em todas as possibilidades que o sistema de duplo-híbrido pode proporcionar ao estudo dos interactomas, o presente trabalho buscou apresentar, através de uma revisão bibliográfica, uma visão geral sobre as atuais aplicações do sistema de duplo-híbrido e as tecnologias variantes baseadas neste sistema, e também uma visão experimental sobre a funcionalidade prática da estratégia do duplo-híbrido clássico. Durante o desenvolvimento experimental deste trabalho, foram acompanhados experimentos referentes à construção de iscas de proteínas príon celular PrPc que futuramente serão utilizadas em varreduras de uma biblioteca de cDNA de epitélio olfatório através da técnica de duplo-híbrido clássico, e também servirão como uma base para a implementação do sistema de duplo-híbrido no laboratório de neurobiologia do Departamento de Patologia Básica da UFPR.