Associação do gene MASP1 e supressão da proteína MASP-3 no câncer cervical e lesão de alto grau

Abstract

Resumo: O câncer do colo do útero (CC) é o quarto tipo de câncer mais comum em mulheres e para o ano de 2023 foram estimados 17.010 casos novos no Brasil, o que representa um risco considerado de 13,25 casos a cada 100 mil mulheres. O câncer é uma doença multifatorial e que envolve diferentes mecanismos celulares. Determinar perfis genéticos de suscetibilidade são de grande relevância para definições de tratamentos, diagnósticos e acompanhamento dos pacientes. A expressão diferencial das proteínas altamente expressas no colo uterino normal ou suprimidos em tecidos tumorais, como MASP-1 e MASP-3, respectivamente, pode ocorrer devido a interferência de nucleotídeos de polimorfismo único (SNPs) localizados em regiões regulatórias do gene MASP1, levando a alterações na taxa de expressão de transcritos e consequentemente na progressão do câncer. Objetivos: O objetivo desse estudo foi analisar a influência de SNPs presentes nas regiões reguladoras do gene MASP1 em CC, lesões intraepiteliais cervicais de alto grau (NIC) e a progressão dessas NIC de alto grau para CC, bem como avaliar a quantificação da MASP-3 no tecido tumoral do CC. Metodologias: Nove polimorfismos das regiões reguladoras do gene MASP1 (rs13064994, rs13094773, rs7609662, rs698105, rs3864098, rs1108450, rs72549262, rs1109452 e rs85031) foram genotipados em 99 pacientes CC, 219 NIC de alto grau, 121 controles saudáveis e 129 doadoes de sangue, pela técnica de PCR-SSP multiplex. A imunohistoquímica foi realizada pela técnica tissue microarray (TMA) em amostras de colo uterino obtidas por biópsia de histerectomia embebida em parafina usando anticorpo primário anti-MASP-3. Resultados: Foi verificada uma associação significativa dos haplótipos de MASP1 GTG_CCC_CCA (CC – OR:2,42, CI:1,14-5,14; NIC de alto grau – OR:18,66, IC:3,51- 23,91) e GTG_CCA_CCG (CC – OR:4,39, CI:1,92- 9,99; NIC de alto grau – OR:30.24, IC:4.88-58.29) com CC e NIC de alto grau. A associação positiva do haplótipo GCG_CCC_CCG (OR:13,50, CI:4,92-26,71) com a progressão da NIC de alto grau para CC. O nível de expressão tecidual de MASP-3 no tecido tumoral foi significativamente menor que o tecido normal adjacente (p=0,0013). Conclusão: Os dados genéticos deste estudo sugerem que os mecanismos celulares afetados pelos haplótipos das regiões reguladoras de MASP1 e do exon 12 podem ser considerados possíveis fatores para compreendermos a supressão da expressão de MASP-3 no tecido tumoral de CC. As análises haplotípicas deste trabalho podem ser fatores de suscetibilidade para o CC e NIC de alto grau ou à progressão da NIC de alto grau para o CC.

Abstract: Cervical cancer (CC) is the fourth most common type of cancer in women and for the year 2023, were estimated 17,010 new cases in Brazil, which represents a considered risk of 13.25 cases per 100,000 women. Cancer is a multifactorial disease that involves different cellular mechanisms. Determining genetic susceptibility profiles is of great relevance for defining treatments, diagnoses and patient follow-up. Differential expression of highly expressed proteins in normal uterine cervix or suppressed in tumor tissues, such as MASP-1 and MASP-3, respectively, may occur due to interference of single polymorphism nucleotides (SNPs) located in regulatory regions of the MASP1 gene, leading to to alterations in the expression rate of transcripts and consequently in the progression of cancer. Objectives: The aim of this study was to analyze the influence of SNPs present in the regulatory regions of the MASP1 gene in CC, high-grade cervical intraepithelial lesions (CIN) and the progression of these high-grade CIN to CC, as well as to evaluate the quantification of MASP-3 in the CC tumor tissue. Methodologies: Nine Polymorphisms of the regulatory regions of the MASP1 gene were genotyped in 99 CC patients, 219 high grade NIC, 121 healthy controls and 129 blood donations (rs13064994, rs13094773, rs7609662, rs698105, rs3864098, rs1108450, rs72549262, rs1109452 e rs85031) , by the PCR-SSP multiplex technique. Was performed the tissue microarray immunohistochemistry (TMA) technique on cervical specimens provided by paraffinembedded hysterectomy biopsy using anti-MASP-3 primary antibody. Results: A significant association of MASP1 GTG_CCC_CCA haplotypes (CC – OR:2.42, CI:1.14-5.14; high-grade CIN – OR:18.66, CI:3.51-23.91) and GTG_CCA_CCG (CC – OR:4.39, CI:1.92-9.99; high-grade CIN – OR:30.24, CI:4.88-58.29) with CC and highgrade CIN. The positive association of the GCG_CCC_CCG haplotype (OR:13.50, CI:4.92-26.71) with progression from high-grade CIN to CC. The level of tissue expression of MASP-3 in tumor tissue was significantly lower than in adjacent normal tissue (p=0.0013). Conclusion: The genetic data of this study suggest that the cellular mechanisms affected by the haplotypes of the regulatory regions of MASP1 and exon 12 can be considered possible factors for understanding the suppression of MASP-3 expression in CC tumor tissue. The haplotype analyzes of this work may be susceptibility factors for CC and high-grade CIN or the progression of high-grade CIN to CC.