Caracterização da ppH-47, uma proteina altamente fosforilada em hipocampo de rato

Abstract

Resumo: Caracterização da pH-47, uma proteína altamente fosforilada em hipocampo de rato. A fosforilação proteica é possivelmente o mais importante mecanismo pelo qual as respostas celulares são induzidas ou controladas por sinais extracelulares, especialmente no tecido cerebral onde os substratos de proteínas-quinases são marcadamente numerosos. O sistema fosforilante da ppH-47 foi inicialmente detectada em auto-radiografias preparados de microfatias de hipocampo de rato incubadas com C32Plfosfato (Rodnight et al., 1988). O sistema fosforilante tem interessantes características, tais como Ca2+ dependência em adultos, ontogenia pós-natal e uma distribuição acentuada nas regiões do sistema limbico (Rodnight et al., 1991). Além disso a ppH-47 é Tritoninsolúvel e ausente na fração sinaptossomal. A análise dos fosfoaminoácidos mostrou que aparentemente a fosfoserina é o único resíduo marcado. Estas características, juntamente com a mobilidade bidimensional e o mapeamento fosfopeptidico com protease VQ sugere a identidade com a proteína astrocítica - GFAP. A principal banda imunoreativa observada com soro policlonal anti-GFAP corresponde a ppH-47, mas não há correspondência entre o estado de fosforilação e a quantidade imunoreativa de GFAP em diversas regiões estudadas. Isto sugere que a ppH-47 é a isoforma fosforilada da GFAP com variável distribuição regional, ou que a variação da atividade do sistema fosforilante é devido a diferenças nas atividades quinase(s) e/ou fosfatase(s) sobre a proteína.

Abstract: Characterization of ppH-47, a protein higly phosphorylated in the hippocampus. Protein phosphorylation is possibly the most important mechanism by which cellular responses are induced or controlled by extracellular signals, especially in brain tissue where substrates of the protein kinases are remarkably numerous. The phosphoprotein ppH-47 was first detected on autoradiographs prepared from micro-slices of rat hippocampus incubated with [32P]phosphate (Rodnight et al, 1988). The ppH-47 phosphory1ating system has several interesting characteristics, such as Ca2+ dependency in adult rat, stimulation by glutamate, delayed postnatal ontogeny, and a characteristic distribution in limbic system (Rodnight et al., 1991). Moreover we observed its Tritoninsolubility and absence in synaptosome. Phosphoamino acid analysis yelded phosphoserine as the only labelled amino acid. These characteristics, together with mobility in two dimensional electrophoresis and phosphopeptide mapping suggests an identity with glial fibrillary acidic protein (GFAP). The main immunoreative band observed with anti-GFAP corresponded to ppH- 47, but there was no correspondence between the phosphorylation rate of ppH-47 and the quantity of immunoreactive GFAP in the different brain regions studied. This suggests that either ppH-47 is a phosphory1ated isoform of GFAP with variable regional distribution, or that variation in phosphorylating activity of the system is due to differences in protein kinase and/or phosphatase activity towards GFAP.