Ação do retinol na biossíntese de N-glicoproteínas em culturas de células de Sertoli

Abstract

Resumo: Esta tese pretendeu investigar efeitos do retinol sobre a N-gl 1 cosi 1 ação de proteínas em células de Sertoli As células de Sertoli desempenham papel importante no suporte e controle da espermatogênese Além disso, parecem ser células alvo da vitamina A, substância que exerce efeitos modulatór1os importantes sobre a esper matogênese. Na primeira fase deste trabalho, esbeleceram-se algumas características das gl 1coproteínas de células de Sertoli A hidrólise ácida 3 forte de proteínas marcadas com Cl- H1glicose indicou a presença de galactose, fucose, manose, W-aceti1-galactosamina Também foi detectada a e N-aceti1-glícosami na presença de ácido N-aceti1-neuramlnico Cerca de 50% das glicoproteínas das células de Sertoli são N-glicosiladas. A seguir, estabeleceu—se em que condiçSes as culturas de células de Sertoli, obtidas de ratos Wistar de 19 dias, incorporavam manose em glícoproteínas intermediários e nos gl1colipídios A análise cromatográfica das frações que continham os glícolípídios indicou a formação de dolíci1-fosfato-manose e de dolicil—-pirofosfor11-olígossacarídio Para determinação dos efeitos do retinol em culturas de células de Sertoli, estas foram pré-i ncubadas com 10pM de retinol por 10, 36, 48 e 150h antes da adição do precursor radioativo. O retinol induziu um aumento significativo na incorporação de manose no dolíci1-pirofosfori1-oligossacarídio em todos os tempos estudados. Também foi detectado um aumento de incorporação de manose em gl í coproteí nas em 36 e 48h de pré-tratamento com retinol. No estudo do efeito da dose de retinol, o tratamento por 48h com 0,1, 1,0 ou 10,OpM de retinol não alterou a incorporação de manose no dolicil—fosfato. O tratamento com 10,OpM de retinol aumentou significativamente a incorporação de manose no XVIII dol ici1-pirofosfon1— -oligossacarídio e em glicoproteínas. O aumento na g ü cosilaçâo de proteínas, provocado pelo retinol, nâo foi devido a uma estimulação na síntese protéica o retinol nâo afetou os conteúdos celulares de DNA, RNA e proteínas. O retinol induziu um aumento significativo na incorporação de 3 [metil- Hitimidina no DNA, mas nâo alterou a incorporação de 3 14 [5,6- Hiuridina no RNA e de [ U- Cileucina em proteínas. A síntese de dolici1-fosfato-manose mesmo na presença de dolici1-fosfato exógeno, foi maior nas incubações de microssomas obtidos de células de Sertoli tratadas com retinol do que nas que utilizavam microssomas obtidos de células controle. Estes resultados mostram que o retinol provoca uma estimulação na atividade de dolici1 —fosfato- manose sintase.