Isolamento e caracterização molecular de bactérias do mangue de Guaratuba no litoral do Paraná

Abstract

Resumo: Possuindo a maior versatilidade metabólica entre os seres vivos, os procariontes são capazes de realizar funções de extrema importância para o meio ambiente onde vivem e são peças fundamentais nos ciclos bioquímicos. No ambiente de manguezal, procariontes possuem a função de contribuir na formação dos solos e da vegetação, sendo também um dos principais decompositores da matéria orgânica. Apesar da vasta importância a grande maioria dos procariontes ainda são desconhecidos, assim como, a função que desempenham nesse ecossistema. Este trabalho teve como objetivo isolar bactérias do mangue de Guaratuba no litoral do Paraná, com capacidade de fixação de nitrogênio e produção de celulases. Em um primeiro esforço amostral, realizado no sítio sambaqui Cabaraquara, Guaratuba – PR, foram selecionados procariotos capazes de se desenvolver em meio de cultura sem a presença de nitrogênio fixado. Esta etapa teve a finalidade de identificar organismos capazes de realizar fixação biológica de nitrogênio. Dois isolados foram selecionados e submetidos à análise taxonômica através do sequenciamento parcial do gene 16S rRNA. O isolado identificado como A12 apresentou 100% de identidade com a espécie Streptomyces mirabilis de acordo com o no banco de dados RDP e o segundo isolado A19 apresentou 100% de identidade com a espécie Bacillus nealsonii. Os mesmos foram submetidos ainda a determinação da atividade de nitrogenase pelo método de redução de acetileno em etileno, quanto ao crescimento em meio de cultura sem NH+4. Os isolados não apresentam reação de redução de acetileno em etileno. Uma segunda coleta foi realizada em ambiente de mangue nas proximidades do sambaqui do rio Boguaçu em Guaratuba-PR, onde bactérias heterotróficas foram isoladas e um total de 312 colônias foram submetidas à clusterização de dados de espectrometria de massa de célula intacta. Todos os espectros foram analisados com o sistema de maldi-biotyper e apresentaram semelhanças com bactérias dos gêneros Bacillus, Brevibacillus, Lysinibacillus, Paenibacillus e Vibrio. Foram selecionados 9 isolados, distantes filogeneticamente na clusterização dos espectros, para analises taxonômicas através do sequenciamento parcial do gene 16S rRNA. De acordo com banco de dados RDP os isolados apresentam semelhanças com bactérias dos gêneros Bacillus e Lysinibacillus e Vibrio. Foram selecionados 9 isolados para avaliar a capacidade de degradação de celulose, 4 isolados demostraram desempenho quanto a produção de enzimas com atividade celulositica tendo como única fonte de carbono Carboximetil Celulose.