Uso da hibridização fluorescente in situ (FISH) para detecção de Chlamydia sp. em aves silvestres

Abstract

Resumo: A clamidiose aviária é uma doença bacteriana de grande importância tanto para espécies aviárias quanto para o ser humano, levantando a necessidade de estabelecimento de diagnóstico rápido e efetivo para detecção das bactérias do gênero Chlamydia, causadoras da doença. O presente trabalho objetiva descrever a detecção de Chlamydia sp. por meio da técnica de hibridização fluorescente in situ (FISH) em cortes histológicos de pulmão, baço e segmentos de intestino de pombos-comuns (Columba livia), fixados em formol 10%. Amostras de 74 pombos-comuns foram avaliados pela técnica FISH e por histopatologia convencional; A sonda utilizada seguiu uma sequência de 20 bases para anelamento, correspondente ao gene codificados das MOMP (Major Outer Membrane Protein) das bactérias do gênero Chlamydia, e acrescida do fluorocromo Alexa Fluor 555®. A histopatologia evidenciou predominantemente enterite linfohistiocitária e/ou granulocítica, e serosite/miosite linfohistiocitária em 28,1% dos intestinos. Esplenite granulomatosa e linfohistiocitária, perivasculite, e áreas multifocais de necrose, distribuídas em 78,4% das amostras de baço avaliadas; Em pulmão foram observados quadros de pneumonia linfohistiocitária e/ou granulocítica, perivasculite linfohistiocitária em 62,2%, além de hiperplasia do tecido linfóide associado aos brônquios (BALT) em 36,5%. As 74 amostras histológicas submetidas a técnica de FISH foram classificadas quanto a distribuição de sinalizações em focal (+), multifocal em até 25% do tecido (++), sinalizações entre 25 e 50% do tecido (+++), e sinalizações superiores em 50% do tecido avaliado (++++). Destas, foram observadas sinalizações positivas em 76% dos intestinos, sendo 39,3% com sinalizações +; 33,9% com sinalizações ++; 16% apresentaram sinalizações +++, e 10,7% das amostras apresentaram sinalizações ++++. Já as amostras esplênicas, das 74 amostras, 80% foram positivas pela técnica, destas 30,5% classificadas em +; 37,3% apresentaram sinalizações em ++; 23,7% com sinalizações distribuídas em +++, e 8,5% apresentaram sinalização com distribuição superior a 50% do tecido ++++. A sinalização positiva foi observada em 88% das amostras pulmonares avaliadas, sua classificação em + foi observada em 18,5% das amostras, seguida de 50,8% com classificação em ++. A classificação em +++ foi observada em 18,5% das amostras e ++++ em 12,3%. De acordo com os resultados, a FISH mostrou-se uma técnica possível de ser utilizada para detecção de Chlamydia sp. em cortes histológicos de intestino, baço e pulmão de pombos-comuns (Columba livia).

Abstract: The avian chlamydiosis is a bacterial disease of high relevance for avian species as well as for humans, increasing the necessity of establishing fast and effective diagnosis for the detection of the bacteria of the genus Chlamydia, responsible for the diseases. The present study aims to describe the detection of Chlamydia sp. by fluorescence in situ hybridization (FISH) in histological sections of lung, spleen, and intestine from common pigeons (Columba livia), fixed in 10% formalin. Samples from 74 common pigeons were evaluated by FISH and conventional histopathology; the probe used followed a 20-base sequence for annealing, corresponding to the gene encoding the MOMP (Major Outer Membrane Protein) of bacteria of the gender Chlamydia, and added the Alexa Fluor 555® fluorochrome. Histopathology showed predominantly lymphohistiocytic and/or granulocytic enteritis, and lymphohistiocytic serositis/myositis in 28.1% of the intestines. Granulomatous and lymphohistiocytic splenitis, perivasculitis, and multifocal areas of necrosis distributed in 78.4% of the spleen samples evaluated; In lung, lymphohistiocytic and/or granulocytic pneumonia, lymphohistiocytic perivasculitis 62.2%, and bronchus-associated lymphoid tissue hyperplasia (BALT) in 36.5% were observed. The 74 histological samples submitted to the FISH technique were classified according to the distribution of signalizations into focal (+), multifocal in less than 25% tissue (++), signalizations between 25 and 50% of the tissues (+++), and signalizations higher than 50% of the tissues analyzed (++++). Of these, positive signalizations were observed in 76% of the intestines, of which 39.3% showed + signals; 33.9% showed ++ signals; 16% showed +++ signals, and 10.7% of the samples showed ++++ signals. As for the splenic samples, of the 74 samples, 80% were positive by the technique, of these, 30.5% classified as +; 37.3% showed ++ signaling; 23.7% showed signaling distributed in +++, and 8.5% showed signaling with distribution greater than 50% of the tissue ++++. Positive signaling was observed in 88% of lung samples evaluated, its classification in + was observed in 18.5% of samples, followed by 50.8% with classification in ++. The classification in +++ was observed in 18.5% of the samples and ++++ in 12.3%. According to the results, FISH proved to be a possible technique to be used for detection of Chlamydia sp. in histological sections of intestine, spleen, and lung of common pigeons (Columba livia).