Estudo de mutações no éxon 9, e regiões flanqueadoras, do gene F12 (Hageman Factor) do sistema de coagulação em pacientes com angioedema hereditário

Abstract

Resumo: O angioedema hereditário (AEH) é uma doença genética de herança autossômica dominante e é definida pela deficiência quantitativa e/ou funcional do inibidor de C1 (C1-INH), que acarreta crises de edema e acometimento de diversos órgãos. Estima-se que sua prevalência seja de 1:50.000 nascimentos, não havendo diferenças entre grupos étnicos. O AEH com C1-INH normal é mais raro, afeta principalmente mulheres e se caracteriza por mutações no gene F12 da cascata de coagulação. O gene F12 codifica a proteína FXII (fator de Hageman), envolvida na geração de cininas, como a bradicinina, promove a formação de edema, e os níveis de expressão no plasma da proteína FXII podem ser regulados por estrogênio, tornando esta a característica mais marcante do AEH com C1-INH normal. Esse trabalho tem seu interesse focado em identificar alterações moleculares do éxon 9 do gene F12, bem como suas regiões flanqueadoras, seus sítios de splicing e limite (éxon/íntron 8 e 9), em pacientes com AEH, e associar as alterações genéticas identificadas com os sinais clínicos. Participaram deste estudo 20 pacientes e 4 familiares do Ambulatório de Alergia e Imunologia Pediátrica do Complexo Hospital de Clínicas, Universidade Federal do Paraná, com diagnóstico clínico de Angioedema Hereditário e com dosagem sérica normal de C1-INH e C4. Foi coletada amostra sanguínea de cada indivíduo para a quantificação dos níveis séricos de C1-INH e C4 pelo método de nefelometria e para a amplificação da região desejada do DNA pela técnica de PCR (Reação em Cadeia da Polimerase). Logo após, foi realizado o sequenciamento automático por eletroforese capilar e os eletroferogramas das sequencias obtidas foram alinhados contra a sequência do gene F12 e analisados através do software GENEIOUS. Em pacientes com AEH com C1-INH normal, a análise genética é atualmente o único método que pode possibilitar o diagnóstico definitivo. A mutação c.983C>A em heterozigose (p.Thr328Lys) foi detectada em 12 pacientes e 3 familiares. Esta mutação é frequentemente encontrada em pacientes com esta forma da doença em outros estudos. E, foi encontrado uma nova mutação, c.799C>T em heterozigose (p.Arg267Trp) no éxon 8 do gene F12 em uma paciente deste estudo e em seu pai. A mutação recentemente identificada pode influenciar na estrutura molecular e funcionamento adequado da proteína, e pode ser um caso de penetrância incompleta. O baixo índice de histórico familiar no estudo pode ser por pacientes assintomáticos portadores de mutações resultantes de AEH com C1-INH normal, portanto, a ausência de histórico familiar não deve impedir a busca por diagnóstico através de teste genético. Os casos relatados e publicações realizadas trazem à discussão a terapêutica de uma situação complexa da doença que pode levar a óbito se não tratada corretamente. Palavras-chave: Angioedema. Hereditariedade. Gene F12. Estrogênio. Exoma.

Abstract: Hereditary angioedema (HAE) is a genetic disease of autosomal dominant origin and is defined by the quantitative and / or functional deficiency of the C1 inhibitor (C1-INH), which causes edema attacks and the involvement of several organs. It is estimated that its prevalence is 1: 50,000 births, with no differences between ethnic groups. The HAE with normal C1-INH is rarer, mainly affects women and stands out for mutations in the F12 gene in the coagulation cascade. The F12 gene encodes the protein FXII (Hageman factor), involved in the generation of kinins, such as bradykinin, promotes the formation of edema and the levels of expression in the plasma of the FXII protein can be regulated by estrogen, making this characteristic more striking than HAE with normal C1-INH. This work is focused on identifying molecular changes in exon 9 of the F12 gene, as well as its flanking regions, its splicing and boundary sites (exon / intron 8 and 9), in patients with HAE, and to associate genetic changes with clinical signs. Twenty patients and four family members from the Pediatric Allergy and Immunology Outpatient Clinic of the Hospital de Clínicas Complex of the Federal University of Paraná participated in the study, with a clinical diagnosis of Hereditary Angioedema and with normal serum levels of C1-INH and C4. Blood samples were collected from each individual to quantify serum levels of C1-INH and C4 by the nephelometry method and to amplify the desired region using the PCR (Polymerase Chain Reaction) technique. Soon after, automatic sequencing was performed by capillary electrophoresis and the electropherograms of the sequences obtained were aligned against the sequence of the F12 gene and analyzed using the GENEIOUS software. In patients with HAE with normal C1-INH, genetic analysis is currently the only method that can enable a definitive diagnosis. The heterozygous c.983C> A mutation (p.Thr328Lys) was detected in 12 patients and 3 family members. This mutation is often found in patients with this form of the disease in other studies. And, a new mutation, c.799C> T, was found in heterozygosis (p.Arg267Trp) in exon 8 of the F12 gene in a patient in this study and in her father. The recently identified mutation may influence the protein's molecular structure and proper functioning, and may be a case of incomplete penetrance. The low index of family history in the study may be due to asymptomatic patients with mutations resulting from HAE with normal C1-INH, therefore, the absence of family history should not prevent the search for diagnosis through genetic testing. The reported cases and published publications bring to discussion the treatment of a complex disease situation that can lead to death if not treated correctly. Key-words: Hereditary. Angioedema. Gene F12. Estrogen. Exoma.