Efeitos citotóxicos da 4'-hidroxichalcona e da isoliquiritigenina em células de neublastoma humano
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Data
2018Autor
Escobar, Stephane Janaina de Moura
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Resumo: O neuroblastoma é um câncer infantil com alta mortalidade. As hidroxichalconas têm recebido atenção considerável devido às suas atividades citotóxicas em células tumorais. Deste modo, o objetivo do presente estudo foi caracterizar a citotoxicidade das hidroxichalconas, 4'-hidroxichalcona e isoliquiritigenina (4,2',4'-trihidroxi-chalcona; ISL) em neuroblastoma utilizando um modelo in vitro de células SH-SY5Y. A incubação das células SHSY5Y cultivadas com 4HC (10-60 ?M) por 24 h diminuiu a confluência, a atividade metabólica e os níveis de ATP intracelulares em relação ao controle. Com base nos resultados, a toxicidade celular induzida por 4HC provavelmente está relacionado com as disfunções mitocondriais, como: inibição da respiração mitocondrial, despolarização do potencial de membrana mitocondrial e alterações morfológicas. Além disso, a perda de viabilidade celular foi acompanhada principalmente pelo aumento da exposição de fosfatidilserina na superfície das células, sugerindo que a 4HC poderia induzir a via intrínseca da apoptose em células SH-SY5Y. Além disso, o tratamento com 4HC inibiu a migração/proliferação celular de SH-SY5Y e induziu mudanças significativas na progressão do ciclo celular. A incubação das células SH-SY5Y com 10-100 ?M de ISL (24 h) diminuiu a confluência e os níveis de ATP intracelular em relação ao controle; o inibidor da necroptose necrostatina-1 restaurou os níveis de ATP. A citotoxicidade mediada por ISL não envolveu ativação das caspases 3/7 ou aumento da exposição de fosfatidilserina na superfície das células, indicando que a morte celular foi independente da via clássica da apoptose. O tratamento com ISL inibiu a proliferação/migração celular e modificou a progressão do ciclo celular SH-SY5Y. Nossos resultados mostram que ambas as hidroxichalconas, 4HC e ISL, têm efeitos citotóxicos contra a linhagem celular de neuroblastoma humano SH-SY5Y apresentando valores de EC50 de 21,5 ± 3,4 ?M para 4HC e 25,4 ± 1,4 ?M para ISL. No entanto, os efeitos do 4HC nas células do neuroblastoma estão associados com a disfunção mitocondrial e sugerem morte celular por apoptose enquanto que a atividade de ISL em células de neuroblastoma envolve a morte celular possivelmente por necroptose. Palavras-chave: hidroxichalcona; neuroblastoma; SH-SY5Y; necroptose; apoptose; disfunção mitocondrial. Neuroblastoma is a childhood cancer with high mortality. Abstract: Hydroxychalcones have received considerable attention because of their cytotoxic activities on cancer cells. Thus, the aim of the present study was to characterize the cytotoxicity of the hydroxychalcones, 4'-hydroxychalcone and isoliquiritigenin (4,2',4'-trihydroxychalcone; ISL) to neuroblastoma using an in vitro model of SH-SY5Y cells. Incubation of cultured SHSY5Y cells with 4HC (10-60 ?M) for 24 h decreased cell confluency, cellular metabolic activity and depleted intracellular ATP relative to the vehicle-treated control. The mechanism of 4HC-induced cell toxicity likely involves mitochondria dysfunctional as judged by inhibition of mitochondrial respiration, depolarization of mitochondria membrane potential and morphological alterations. Furthermore, loss of cell viability was accompanied mainly by increase of phosphatidylserine exposure on the surface of cells, suggesting that the 4HC may induce the intrinsic pathway of apoptosis in SH-SY5Y cells. In addition, 4HC treatment inhibited SH-SY5Y cell migration/proliferation in a scratch assay and induced significant changes in the cell cycle progression. Incubation of SH-SY5Y cells with 10-100 ?M ISL (24 h) decreased confluency and intracellular ATP relative to control; the necroptosis inhibitor necrostatin-1 restored ATP levels. ISL-mediated cytoxicity did not involve caspase 3/7 activation or increase of phosphatidylserine exposure on the surface of cells, indicating that cell death was apoptosis independent. ISL treatment inhibited cell proliferation/migration and arrested SH-SY5Y cell cycle transition. Our results showed that both of hydroxychalcones, 4HC and ISL, have cytotoxic effects against human neuroblastoma cell line SH-SY5Y with EC50 values of 21.5 ± 3,4 ?M for 4HC and 25.4 ± 1,4 ?M for ISL. However, 4HC effects on neuroblastoma cells are associated with mitochondrial dysfunctional and it suggest cell death by apoptosis. Whilst, activity of ISL on neuroblastoma cells involves cell death possibly via a necroptotic pathwayx. Keywords: hydroxychalcona; neuroblastoma; SH-SY5Y; necroptosis; apoptosis; mitochondrial dysfunction.
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- Teses [201]