Purificação e propriedades da gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase de músculo de Caiman sp

Abstract

Resumo: D-Gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase de músculo de Caiman sp foi isolada e purificada. O perfil de pH, o ponto isoelétrico, a composição de aminoácidos e as constantes cinéticas foram descritos. Foi demonstrado que a enzima ê um tetrâmero com peso molecular de aproximadamente 140.000 daltons. Eletroforese em gel de poliacrilamida em presença de SDS demonstrou uma única banda, correspondendo à subunidade, com peso molecular de 36.000. Foi demonstrado que nucleotídeos de adenina inibem competitivamente a atividade enzimática com relação ao NAD. Incubação da enzima com ATP, a 0°C causou perda da atividade enzimática, sendo a mesma parcialmente recuperada por aquecimento à temperatura ambiente. A GPDH ê inativada quando incubada em presença de ureia. A reassociação da enzima foi parcial, mesmo em presença de NAD e somente conseguida quando a mesma não estava totalmente dissociada. A GPDH ê inativada quando incubada a 37°C em presença de NADH ou gliceraldeldo-3-fosfato. Foi demonstrado que NAD não tem qualquer efeito protetor em relação a este tipo de inativação, mas que a presença de 2-mercaptoetanol protege a enzima. A GPDH tem aproximadamente 13,8 grupos-SH por mol dos quais 4 são mais reativos, correspondendo aos grupos-SH do sitio ativo. Através de estudos de fixação do NAD sobre a apoenzima, foi verificado que 4 moles de NAD podem ser ligados por mol de enzima. Os resultados obtidos para a GPDH de músculo de Caiman sp demonstram que esta enzima se assemelha mais às enzimas de músculo do que às enzimas de levedura ou bactérias.