Investigação de alterações no Exons 2 do gene ANGPT1 e 9 do gene PLG em pacientes com angioedema hereditário e C1-INH normal

Abstract

Resumo: O Angioedema Hereditário (AEH) é uma doença genética rara e grave do sistema imunológico, de caráter autossômico dominante, causada pela deficiência de inibidor de C1 esterase (C1-INH). Pode ser classificado em 3 fenótipos: pacientes com deficiência quantitativa do inibidor de C1-INH resultando em uma proteína estruturalmente alterada, que não é secretada de forma eficiente apresentando baixo nível e baixa atividade de C1-INH, pacientes com AEH com disfunção de C1-INH onde a proteína é secretada, porém apresenta atividade funcional com nível normal ou superior de C1-INH e pacientes com C1-INH normal. Os pacientes com AEH podem apresentar sintomas durante a infância e adolescência. Recentemente a literatura descreve duas novas mutações no gene da Angiopoietina (ANGPT1) e no gene do Plasminogênio (PLG), associadas ao AEH. O Objetivo deste estudo foi investigar a presença destas mutações no gene ANGPT1 e PLG em pacientes com AEH e C1- INH normal, negativos para mutação do gene F12. Foram realizados exames bioquímicos avaliando os níveis séricos de C1-INH e C4 em 15 pacientes, após a coleta de sangue foi realizado extração do DNA, quantificação, diluição a uma concentração de 100 ng/uL, em seguida amplificação por PCR para avaliação molecular das mutações c.807G>T.p.A119S no exon 2 do gene ANGPT1 e c.988A>G p.K330E. no exon 9 do gene PLG, e em seguida o produto de amplificação foi avaliado em eletroforese em gel de agarose 1%, foi realizada a preparação do DNA para o sequenciamento com as reações de, purificação e precipitação. As análises dos eletroferogramas foram realizadas pelo software FASTA. Foram sequenciadas amostras de 15 pacientes mulheres com idades de 09 a 57 anos, e exames bioquímicos com níveis séricos de C1-INH e C4 normais variando de 0,22 a 0,39g/l e 0,1 a 0,4g/l respectivamente, histórico familiar possuindo sinais e sintomas clássicos de AEH, não foram encontradas as mutações dos genes ANGPT1 e PLG, entretanto para o gene PLG foi encontrado SNP silencioso, sendo 2 pacientes homozigotas e 5 heterozigotas. Mais estudos sobre SNPs são necessários para esclarecer estes achados pois eles podem ser utilizados como marcadores moleculares do AEH e alvo para novos tratamentos. Palavra Chave: Angioedemas Hereditários. Bradicinina. Mutação. Angiopoietina-1. Plasminogênio.

Abstract: Hereditary Angioedema (AEH) is a rare and severe autosomal dominant genetic disorder of the immune system caused by inhibition of C1 esterase (C1-INH). It can be classified into 3 phenotypes: patients with quantitative C1-INH inhibitor deficiency, resulting in an altered structural protein that is not efficiently secreted, low level and low C1-INH activity, patients with AEH with dysfunction. C1-INH where protein is secreted, but has functional activity with normal or higher C1-INH level and patients with normal C1-INH. Patients with AEH may have symptoms during childhood and adolescence. Recently, the literature describes two new mutations in the angiopoietin gene (ANGPT1) and the plasma gene (PLG) associated with AEH. The aim of this study was to investigate the presence of these mutations in the ANGPT1 and PLG gene in patients with normal AEH and C1-INH, with probability of mutation in the F12 gene. Available biochemical tests were performed for the chemical levels of C1-INH and C4 in 15 patients, following a blood collection performed by DNA extraction, quantification, dilution and a concentration of 100 ng / ?L, later amplification by PCR for molecular evaluation of the samples. c.807G> TpA119S mutations in exon 2 of the ANGPT1 gene and c.988A> G p.K330E. in exon 9 of the PLG gene, and then the amplification product was evaluated by 1% agarose gel electrophoresis, DNA preparation was performed for sequencing with reproduction, purification and reproduction. The electropherogram analyzes were performed by the FASTA software. Tests of 15 female patients aged 09 to 57 years were sequenced, and biochemical tests with normal C1-INH and C4 chemical levels ranging from 0.22 to 0.39g / l and 0.1 to 0.4g / l, respectively. , family history of classic signs and symptoms of AEH, were not found as mutations of the ANGPT1 and PLG genes, while the PLG gene was found silent SNP, being 2 homozygous and 5 heterozygous patients. Further studies on SNPs are needed to clarify these findings, as they can be used as AEH molecular markers and targets for further testing. Keyword: Hereditary Angioedemas. Bradykinin. Mutation. Angiopoietin-1. Plasminogen.