Análise do efeito de fungos basidiomicetes sobre a micromorfologia e crescimento de Candida albicans

Abstract

Resumo : Leveduras do gênero Candida são consideradas importantes patógenos oportunistas em humanos. A capacidade de espécies de Candida em alternar entre a forma leveduriforme e filamentosa tem sido associada à patogênese. Diversas condições ambientais podem desencadear essa mudança morfológica e são frequentemente utilizadas em modelos para estudos in vitro sobre o efeito de agentes antifúngicos. Os fungos basidiomicetes têm sido estudados devido à grande variedade de seus bioprodutos. Macrocybe titans foi recentemente relatado no Brasil. Existem poucos registros na literatura sobre o potencial biotecnológico deste fungo. Outro fungo basidiomicete, Ganoderma lucidum, exibe um amplo espectro de atividades antibacterianas e antivirais. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade de extratos aquosos de M. titans e G. lucidum na micromorfologia e crescimento de Candida albicans. Foi utilizada a cepa ATCC 90028 de C. albicans e os extratos de M. titans e G. lucidum pertencentes ao banco de germoplasma do Núcleo Experimental de Micologia Aplicada (NEMA) da Universidade Federal do Paraná – Setor Palotina. Para o preparo dos extratos de cogumelos foi utilizado basidiomas secos triturados, eluído. Uma parte do volume foi filtrada em filtro de 0.22 µM. Foram, portanto, obtidas as frações bruta e diluída dos extratos. Para a análise do efeito dos extratos sobre o crescimento de C. albicans, o inóculo inicial foi diluído para uma densidade ótica (D.O.) de 0,1 a 600 nm, e os extratos de cogumelos foram adicionados na proporção 1:10 e a cultura mantida por 12 horas. Foi verificada a D.O. após este período. Após 12 horas de cultivo, na presença e ausência dos extratos foi realizada a contagem das células em câmara de Neubauer. Também foi verificado o potencial efeito fungistático ou fungicida dos extratos de M. titans sobre a viabilidade de C. albicans através da técnica de contagem em placa de cultura por microgota. O efeito dos extratos dos basidiomicetes sobre a micromorfologia de C. albicans foi realizado cultivando a levedura em ágar fubá com Tween 80 na ausência e presença dos extratos. Após 72 horas, os microcultivos foram analisados através de microscopia ótica, para observação de estruturas típicas como pseudo-hifas, blastoconídios e clamidoconídios. Foi observado que, em todos os ensaios, os extratos inibiram o crescimento e alteraram a micromorfologia de C. albicans. Foi possível observar uma redução nos valores de D.O. de 86% e 44% e de 50% e 22% quando C. albicans foi cultivada na presença dos extratos bruto e filtrado de M. titans e G. lucidum, respectivamente. Os extratos bruto e filtrado de M. titans causaram uma inibição de 64,4% e 51,1%, respectivamente, no número de colônias de C. albicans, após 12 horas de contato. A contagem em câmara de Neubauer revelou uma diminuição de 56% e 42% no número de células viáveis, com os extratos bruto e filtrado de M. titans e de 49% e 42%, para G. lucidum, respectivamente, em relação ao controle. A análise da micromorfologia de C. albicans, após contato com o extrato filtrado revelou uma diminuição da formação de clamidoconídios e um aumento na filamentação das hifas, após tratamento com M. titans e um sutil aumento na formação de blastoconídio, em relação ao extrato de G. lucidum.