Efeito da suplementação com óleo de fígado de tubarão em diferentes doses e períodos de tempo sobre capacidade proliferativa de linfócitos e incorporação de alquilgliceróis em tecidos linfóides de ratos Wistar

Abstract

Resumo: O óleo de fígado de tubarão (OFT) é a principal fonte natural de alquilgliceróis (AKG), éteres lipídicos constituídos por uma cadeia hidrocarbônica, saturada ou insaturada, unida por ligação do tipo éter a uma das hidroxilas do glicerol. A suplementação com AKG é capaz de interferir no funcionamento das células do sistema imune de forma significativa, tanto em situações patológicas como na homeostase. Vários estudos têm demonstrado sua ação imunoestimulatória, no entanto não há consenso sobre quanto de OFT deve ser ingerido e a duração da suplementação que permita incorporação de AKG para haver resposta biológica. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da suplementação com OFT (Ecomer®) em diferentes concentrações e períodos de tempo sobre a capacidade proliferativa de linfócitos do timo e de linfonodos mesentéricos, bem como dosar a incorporação celular de AKG nos mesmos tecidos de ratos Wistar. Ainda, foi avaliada a influência das diferentes doses e dos diferentes tempos de suplementação sobre hematócrito e concentração de hemoglobina no sangue, massa corpórea e do fígado, do tecido adiposo mesentérico e do músculo sóleo. Para tanto, os animais foram separados nos seguintes grupos: 1g / kg (animais suplementados com 1g de OFT / kg de peso corpóreo), 2g / kg (2g de OFT/ kg g p.c.), 4g / kg (4g de OFT / kg p.c.), e 5g / kg (5g de OFT/ kg p.c.). Em cada grupo, animais foram suplementados durante 1, 2, 6 ou 7 semanas. Após eutanásia dos animais, os linfócitos isolados de timo e linfonodos mesentéricos foram cultivados na presença de Alamar Blue® por 24, 48 e 72h para avaliação da capacidade proliferativa. Para identificação e quantificação de alquilgliceróis presentes nos tecidos linfóides, estes foram submetidos à extração lipídica, metanólise ácida e acetilação, e as amostras foram analisadas por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massa (GC-MS). O hematócrito foi determinado utilizando-se capilar de vidro e centrífuga de microhematócrito, e a concentração de hemoglobina foi determinada através do método da cianometahemoglobina. A suplementação com AKG interferiu na proliferação linfocitária de maneira diferente em linfócitos T e B, e em diferentes tecidos linfóides. Não houve elevação proporcional da proliferação com o aumento da dose e do tempo de suplementação. A avaliação inicial dos dados de GC-MS mostrou que a incorporação de AKG em timo parece depender mais da dose do que do tempo de suplementação, e a incorporação em linfonodos mesentéricos sofreu maior influência do tempo de suplementação. A oferta de AKG em todas as doses e tempos de suplementação não induziu ganho de massa corpórea, ganho de massa nos tecidos avaliados ou alterações no hematócrito e na dosagem de hemoglobina. Palavras-chave: Sistema imunitário. Proliferação linfocitária. Óleo de fígado de tubarão. Alquilgliceróis. GC-MS.

Abstract: Shark liver oil (SLO) is the main natural source of alkylglycerols (AKG), lipid ethers consisting of a saturated or unsaturated hydrocarbon chain, bonded by ether-type binding to one of the hydroxyls of glycerol. AKG supplementation is able to interfere significantly with the functionality of cells of the immune system, both in pathological situations and in homeostasis, and several studies have demonstrated its immunostimulatory action. However, there is no consensus as how much OFT should be ingested and for how long to have a biological response and to allow significant uptake of AKG into cells. Therefore, the objective of this study was to evaluate the effect of OFT (Ecomer®) supplementation in different concentrations and time periods on the proliferative capacity of thymus and mesenteric lymph nodes lymphocytes, as well as the cellular incorporation of alkylglycerols in the same tissues. Also, the influence of the different doses and time periods of supplementation on hematocrit and hemoglobin concentration in the blood, as well as body, liver, mesenteric adipose tissue and soleus muscle mass were evaluated. The animals were separated into the following groups: 1 g/kg (supplemented with 1 g OFT/kg b.w.), 2 g/kg (2 g OFT/kg b.w.), 4 g/kg (4 g OFT/Kg b.w.), and 5 g/kg (5 g OFT/kg b.w.). In each group, animals were supplemented for 1, 2, 6 or 7 weeks. After orthanthasia, lymphocytes isolated from thymus and mesenteric lymph nodes were cultured in the presence of Alamar Blue® for 24, 48 and 72 hours for evaluation of proliferative capacity. For identification and quantification of alkylglycerols present in the lymphoid tissues, these were submitted to lipid extraction, acid methanolysis and acetylation, and the samples were analyzed by gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC-MS). Hematocrit was determined using glass capillary and microhematocrit centrifuge, and hemoglobin concentration using the cyanometahemoglobin method. Supplementation with AKG interferes in lymphocyte proliferation differently in T and B lymphocytes and in different lymphoid tissues. There was no proportional increase in proliferation with increasing dose and time of supplementation. Initial assessment of GC-MS data showed that incorporation of AKG into thymus seems to depend more on dose than on supplementation time, and incorporation into mesenteric lymph nodes undergoes a greater influence of supplementation time. The AKG supply at all doses and times of supplementation did not induce gain of body mass, gain of mass in the evaluated tissues, or changes in the hematocrit and the hemoglobin dosage. Keywords: Immune system. Lymphocyte proliferation. Shark liver oil. Alkylglycerols. GC-MS.