Identificação de mimotopos de Taenia saginata : caracterização e aplicação no diagnóstico da cisticercose bovina

Abstract

Resumo: A cisticercose é uma importante doença parasitária provocada pelo desenvolvimento dos metacestodeos de Taenia saginata (Cysticercus bovis) em tecidos bovinos. Essa doença causa enormes prejuízos à pecuária de corte e é considerada como um grande problema de saúde pública. Ensaios diagnósticos sensíveis e precisos para detecção da parasitose no animal vivo e programas de vacinação permanecem como um desafio. O objetivo desse estudo foi utilizar peptídeos expostos em superfícies de bacteriófagos, previamente selecionados, em imunoensaios de ELISA avaliando soros de bovinos positivos e negativos para a cisticercose na tentativa de encontrar um bom antígeno para ser usado na detecção ante-mortem da cisticercose. Usando a tecnologia de Phage Display, obtivemos 8 mimotopos que apresentaram alta reatividade frente ao soro de bovinos positivos para cisticercose. Dentre as sequencias apresentadas por estes clones, os aminoácidos que apresentaram maior prevalência foram a prolina, a treonina, a alanina e a arginina. Quando estes aminoácidos foram substituídos por alanina ou serina, no ensaio de Ala scan realizado com os mimotopos Tsag 1, Tsag 2 e Tsag 3, ocorreu diminuição da reatividade destes peptídeos, evidenciando a importância da presença desses aminoácidos. Avaliando o potencial antigênico dos mimotopos obtidos frente a soros de bovinos positivos e negativos, obtivemos um mimotopo, o Tsag 3, com alta correlação em relação ao antígeno bruto de C. bovis na identificação de animais positivos e negativos. Os nossos resultados demonstram que a tecnologia de Phage Display é eficiente na seleção e identificação de peptídeos reativos à anticorpos de interesse, bem como na identificação de bovinos infectados por C. bovis.

Abstract: Cysticercosis is an important parasitic disease caused by metacestodes of Taenia saginata (Cysticercus bovis) that affects bovine animals. This disease cause great economic loss to cattle and present an impact on the public health system. Sensible and accurate diagnostic methods for the detection of the etiological agents of cysticercosis in infected animals, as well as the implementation of vaccination programmes remain a challenge. The present study aims the use of peptides phage displayed, that were previously selected, in ELISA immunoassays evaluating positive and negative bovine serum for cysticercosis in an attempt to find a good antigen to be used in an ante-mortem detection of cysticercosis. Using the Phage Display technology, we obtained 8 mimotopes that presented a high reactivity to bovine serum positive for cysticercosis. Among the sequences presented by these clones, the aminoacids with most prevalence was proline, threonine, alanine and arginine. When these aminoacids were substituted by alanine ou serine, Ala scan assay developed with the mimotopes Tsag 1, Tsag 2 and Tsag 3, there was diminution of the reactivity of the peptides, evidencing the importance of their presence. Evaluating the antigenic potencial of the mimotopes with positive and negative bovine serum, we obtained one mimotope, Tsag 3, that presented high correlation with the C. bovis crude antigen. Our results demonstrate that the Phage Display technology is efficient by selecting and identificating peptides that react with antibodies of interest, as well as identificating bovine infected with C. bovis.