Development of a recombinant component for acellular pertussis vaccine DTap

Abstract

Resumo: A vacina tríplice bacteriana, contra difteria, tétano e pertussis, possui diversos efeitos adversos, principalmente relacionados ao componente pertussis. Este trabalho pretendeu desenvolver um fração deste componente, possibilitando a produção de uma vacina acelular (DTPa), mais segura. Foi utilizada a tecnologia recombinante através da qual uma porção do gene que codifica a toxina pertussis foi clonada por Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e expressa em Escherichia coli. As condições de indução otimizadas (0,1 mM IPTG, 3 horas, 37°C) levaram a um rendimento de 12 mg.L-1 da proteína recombinante após a purificação. A identidade da proteína foi confirmada por Western blotting e espectrometria de massas. Desta forma, o presente trabalho desenvolveu uma metodologia adequada visando a produção industrial de DTPa no Brasil.

Abstract: Triple bacterial vaccine, against diphtheria, tetanus and pertussis has several adverse effects, mainly related to the pertussis component. This work intended to develop a fraction of this component, enabling the production of an acellular vaccine (DTaP), safer. It was used the recombinant technology through which a portion of the gene encoding pertussis toxin was cloned by Polymerase Chain Reaction (PCR) and expressed into Escherichia coli. The optimized induction conditions (0.1 mM IPTG, 3 hours, 37°C) led to a yield of 12 mg.L-1 of the recombinant protein after purification. Protein identity was confirmed by Western blotting and mass spectrometry. So, present work has developed a suitable methodology aiming industrial production of DTaP in Brazil.