Correlação entre características microscópicas da microbiota vaginal com o perfil do microbioma

Abstract

Resumo: Introdução: Apesar dos avanços nos testes moleculares para o diagnóstico de alteração de microbiota vaginal (AMV), a microscopia continua sendo amplamente utilizada. A observação microscópica de esfregaços com coloração de Gram usando critérios de Nugent (GSS-Nug) é o padrão ouro para o diagnóstico de vaginose bacteriana (VB). A interpretação microscópica da microbiota vaginal também pode ser realizada em esfregaços a fresco usando os critérios de Donders (WMS-Don), que também incluem o diagnóstico de vaginite aeróbia (VA). O perfil do microbioma vaginal baseado no sequenciamento do gene RNAr 16S frequentemente resulta em cinco tipos de comunidades bacterianas, as CSTs (do inglês community-state types) de I a V, sendo a CST IV caracterizada pela ausência de Lactobacillus spp. Objetivos: Foram comparados, neste trabalho, os diagnósticos de AMV usando GSS-Nug e WMS-Don para detecção da CST IV. Além disso, o perfil do microbioma da interpretação das microbiotas do tipo VB e VA por método de WMS-Don também foi comparado. Metodologia: Foram recrutadas 624 mulheres brasileiras em idade reprodutiva, das quais 512 tinham dados completos disponíveis em microscopia e sequenciamento de RNAr 16S V3-V4 (Illumina). Curvas de características de operação do receptor (ROC) de GSS-Nug e WMS-Don foram elaboradas, e suas áreas sob a curva (AUCs) e intervalo de confiança (IC) de 95% calculadas para detecção da CST IV. As abundâncias relativas dos táxons foram usadas para uma análise discriminante linear associada a tamanho de efeito (LEfSe) para identificar táxons aumentados em VA em relação a VB. Resultados: O diagnóstico de VB por GSS-Nug obteve melhor desempenho para detecçãoda CST IV (AUC: 0.88, 95% IC: 0.84-0.91) quando comparada ao WMS-Don (AUC 0.83; IC: 0.80 - 0.87) (P <0,01). A maioria dos táxons aumentados em VA foram Lactobacillus spp., Fusobacterium nucleatum e Enterococcus faecalis. Conclusão: O uso de GSS-Nug para interpretação da microbiota vaginal é preferível ao WMS-Don. Diferentemente da VB, o microbioma associado a VA é aumentado em Lactobacillus spp. e componentes do trato gastrointestinal

Abstract: Introduction: Despite the advances on molecular tests for diagnosis of abnormal vaginal microbiota (AVM), microscopy remains widely used. Microscopic observation of Gram-stained smears for Nugent scoring (GSS-Nug) is the gold standard for the diagnosis of bacterial vaginosis (BV). Vaginal microbiota may also be assessed using wet-mounted smears using Donders criteria (WMS-Don), that also comprises aerobic vaginitis (AV) scoring. Microbiome profiling of the 16S rRNA gene often results into five vaginal community-state types (CSTs), of which CST IV is Lactobacillus-deprived. Objectives: We compared the diagnosis of AVM using GSS-Nug and WMS-Don for detection of CST IV. We further compared the microbiome profiling of AV- and BVmicrobiota of WMS-Don. Methods: We enrolled 624 women of reproductive aged in Brazil, of which 512 had full data available on microscopy and V3-V4 16S rRNA sequencing (Illumina). We constructed receiver operating characteristic (ROC) curves of GSS-Nug and WMS-Don and calculated their area under the curves (AUCs) and 95% confidence interval (CI) for detecting CST IV. We used the relative abundances of taxa for a linear discriminant analysis effect size (lefse) to identify the AV-enriched taxa in relation to BV. Results: Diagnosis of BV by GSS-Nug more accurately detected CST IV (AUC: 0.88, 95% CI: 0.84-0.91) when compared to WMS-Don (AUC 0.83; CI: 0.80 - 0.87) (P<0.01). Most of the AV-enriched taxa were Lactobacillus spp., Fusobacterium nucleatumand Enterococcus faecalis. Conclusion: The use of GSSNug for interpretation of vaginal microbiota is preferred over WMS-Don. Differently from BV, AV-associated microbiome is enriched in Lactobacillus spp. and components of gastrointestinal tract