Efeitos do AZT sobre o metabolismo energetico de mitocondrias isoladas de figado, rim, musculo esqueletico e musculo cardiaco de rato

Abstract

Resumo: A possibilidade de efeitos tecido e carreador específicos com relação à sensibilidade mitocondrial ao AZT foi avaliada neste estudo. O AZT inibiu de forma dose dependente a oxidação do glutamato em mitocôndrias isoladas de fígado, rim e músculos esquelético e cardíaco, estimuladas por ADP. Usando succinato como substrato oxidável, a inibição foi observada somente em mitocôndrias de músculo esquelético e músculo cardíaco. Os mesmos resultados foram obtidos quando mitocôndrias foram desacopladas com FCCP. A atividade NADH oxidase de mitocôndrias intactas e rompidas foi fortemente inibida pelo fármaco nos quatro diferentes tecidos. A determinação da NADH ferricianeto oxidoredutase sugere que o AZT afeta o complexo I excluindo os sítios envolvidos na transferência de elétrons para o ferricianeto. A atividade da succinato oxidase foi inibida pela droga somente em mitocôndrias intactas de músculo esquelético e cardíaco, sugerindo o envolvimento dos sistemas de transporte do succinato. Para comprovar estes efeitos, estudos utilizando [1,4-14C]-succinato em mitocôndrias de fígado e músculo cardíaco foram realizados. Nestes experimentos utilizou-se, à temperatura de 0°C, fenilsuccinato para interromper a reação e o mersalil como inibidor do carreador de dicarboxilatos. Mostrou-se que nas condições experimentais usadas, há inibições pelo AZT do transporte de succinato, através do carreador de 2-oxoglutarato em cerca de 30%, sem descartar a possibilidade de inibição também do carreador de dicarboxilatos. De modo similar foi verificada inibição da atividade da FiF0-ATPase somente em mitocôndrias isoladas dos tecidos musculares. Estes efeitos, em conjunto, indicam inibições tecido e carreador específicas in vitro pelo AZT

Abstract: The possibility of tissue-specific effects regarding mitochondrial sensitivity to AZT was evaluated in this study. When mitochondria isolated from liver, kidney, skeletal and cardiac muscle were oxidising giutamate, a dose-dependent inhibition by AZT of state 3 (ADP-stimulated) was observed; using succinate as substrate the inhibition occurred only in skeletal and cardiac muscle mitochondria. The same results were obtained with FCCP-uncoupled mitochondria. NADH oxidase of intact and disrupted mitochondria, isolated from ali four tissues was strongly inhibited.The determination of NADH ferricyanide oxidoreductase suggests that complex I could be a target for the drug, excluding the sites of electron transfer to ferricyanide. Succinate oxidase activity was inhibited by AZT only in intact mitochondria from skeletal and cardiac muscles, suggesting the involvement of succinate transport systems. To confirm this possibility experiments using [1,4- 14C]-succinate were performed at 0°C, using phenylsuccinate to interrupt the reaction and mersalyl as inhibitor of the dicarboxylate carrier. AZT inhibits the succinate transport via the 2-oxoglutarate carrier. Although the possibility of inhibition of the dicarboxylate carrier could not be eliminated. Similarly, inhibition by the drug on the hydrolytic activity of FiF0-ATPase was observed only in mitochondria of these tissues. These effects altogether, indicate a tissue/carrierspecific inhibition in vitro