Estudos dos mecanismos de estimulação do transporte de aminoacidos neutros por FSH e retinol em celulas de Sertoli

Abstract

Resumo: As células de Sertoli tem um papel importante na regulação do processo espermatogênico e possuem sítios de ligação para o FSH e andrógenos. Além disso, são células alvo da vitamina A, substância que exerce efeitos modulatórios importantes sobre a espermatogênese. Esta tese teve como objetivo esclarecer alguns aspectos do mecanismo de ação do hormônio folículo estimulante (FSH) (responsividade das culturas de células de Sertoli ao FSH e ação mediata do hormônio) e, investigar o mecanismo de ação do retinol no transporte de aminoácidos neutros (ação imediata e mediata). Para este estudo foram utilizados testículos enriquecidos em células de Sertoli (SCE) de ratos e culturas de células de Sertoli provenientes de testículos "SCE" de ratos imaturos. Na primeira parte desse trabalho foi analisado o efeito do FSH de distintas origens e purezas no transporte de aminoácidos neutros e, posteriormente a influência do FSH na síntese de proteínas gerais em culturas enriquecidas em células de Sertoli de ratos imaturos. As culturas de células de Sertoli altamente purificadas são completamente responsívas ao FSH aos 15 min. de tratamento hormonal. As diferentes doses de gonadotrofinas utilizadas estimularam o transporte de aminoácidos neutros com diferenças na potência relativa do hormônio. A sensibilidade desse método foi detectada desde a dose 0,025 mU/ml e nenhum efeito do LH foi observado com respeito ao estímulo no transporte de a-MeAIB^C. Paralelamente foi analisado a ação mediata do hormônio no transporte de aminoácidos e na síntese protéica. O tratamento prolongado com FSH (0,1 mU/ml), aumentou significativamente a incorporação de leucina-^C em proteínas e não foi verificado qualquer alteração estimulatória no transporte de aminoácidos. A seguir, modelos de tratamento agudo e prolongado também forneceu informações a respeito do mecanismo de ação do retinol no transporte de aminoácidos neutros. O retinol induziu um aumento significativo no transporte de aminoácidos neutros em testículos "SCE" e em culturas de células de Sertoli de ratos imaturos. Este estímulo foi observado com as doses de 10 e 20 |iM em tempos curtos (minutos). A ação estimulatória do retinol no transporte de a-MeAIB processa-se através do sistema "A" de transporte dependente de sódio e energia e, envolve a abertura de canais de cálcio dependentes de voltagem, provavelmente do tipo "T". Por outro lado, a ação estimulatória do retinol no transporte de aminoácidos continua sendo observada mesmo na presença de ciclo-heximida em concentrações que reduziram em 95% a síntese protéica. O tratamento prolongado com retinol estimulou a síntese protéica em 15 min. e atingiu um efeito máximo nas 3 h de incubação. Também foi observado que a presença do retinol somente durante o período de pré-incubação (ação mediata ), não teve uma segunda fase no transporte de aminoácidos mediada pela síntese de novo de proteínas. A ação estimulatória do retinol no transporte de aminoácidos não foi aditiva nem com a dose máxima de FSH utilizado. Nos estudos do efeito do retinol em testículos "SCE" de ratos durante o desenvolvimento sexual do animal observou-se uma ação estimulatória na captação de aminoácidos somente em testículos de ratos de 15 dias, aos 30 e 35 dias a captação caiu drasticamente e o retinol foi inefetivo. O tratamento crônico e/ou agudo com propionato de testosterona não teve efeito detectável no transporte de am inoácidos nem em testículos "SCE" nem em células de Sertoli de ratos imaturos. Estes resultados mostram que o FSH e o retinol estimulam o transporte de am inoácidos através de um m ecanism o parcialmente comum, já que, ambos atuam no sistem a "A" de transporte através de canais de cálcio dependentes da voltagem , são independentes da síntese "de novo" de proteínas e, seus efeitos não são aditivos