Caracterizaçao de exopolissacarídeos produzidos por Thelephora terrestris

Abstract

Resumo: Thelephora terrestris é um basidiomiceto que interage com a raiz de Pinus formando uma associação ectomicorrízica. O mecanismo desta interação não é totalmente compreendido, mas tem sido sugerido que glicoconjugados podem estar envolvidos. O fungo Thelephora terrestris foi cultivado em meio MMN tamponado, contendo glucose como fonte de carbono, sob agitação. Nestas condições o fungo secretou polímeros reativos pela técnica fenol-ácido sulfúrico. O meio de cultivo foi precipitado com 3 volumes de etanol e o precipitado foi fracionado em dois componentes por coluna de DEAE-Sepharose: uma fração neutra (NeP) e uma fração polianiônica (B). A eluição do polímero carregado foi acompanhada por eletroforese, apresentando várias bandas coradas por Coomassie Blue (proteína) e ácido periódico-prata (carboidratos) demonstrando a heterogeneidade dos produtos secretados pelo fungo. As bandas de 58, 84 e 94 kDa evidenciadas na eletroforese, aumentaram com concentrações crescentes de glucose no meio de cultivo. A fração NeP foi subfracionada em coluna de Sepharose CL 6B, resultando em 3 frações NeP1, NeP2 e NeP3. As frações NeP2 e NeP3 foram caracterizadas como uma (3-glucana ligada (1-»6) (pustulana) e uma (B-glucana ligada (1-»3) respectivamente. A fração NeP1 foi filtrada através da membrana de exclusão molecular (30 kDa) e mais 2 subfrações foram obtidas, NeA e NeB. A análise por exclusão molecular (HPSECMALLS) mostrou que a fração NeB formava um agregado molecular com massa molar de 15 kDa (60%), e em menor proporção moléculas com massas molares em torno de 88 kDa a 190 kDa. A fração NeB continha as seguintes unidades monossacarídicas: Man, Gal, Fuc e Xyl na proporção molar de 50:29:11:10 respectivamente. A subfração NeB foi submetida à análise de metilação e espectroscópica por RMN 1H, 13C e 2D (HMQC). Estas análises mostraram uma cadeia principal de unidades de a-D-Manp (1 —>6), substituídas em 0-2 por cadeias laterais contendo unidades de Fucp, (3-Xylp and (3-Galp)