Desenvolvimento e validação de meio de cultura para detecção de Pseudomonas Aeruginosa em água purificada para fins farmacêuticos

Abstract

Resumo: A água purificada é uma das principais matérias-primas para medicamentos e cosméticos. Participa efetivamente de processos de esterilização por via úmida, limpeza de equipamentos e é utilizada nas análises de controle de qualidade. Assim, influencia diretamente na qualidade dos produtos e portanto deve seguir um rigoroso parâmetro de qualidade físico-químico e microbiológico. A Farmacopéia Brasileira 5 ed. que passa a vigorar em fevereiro do presente ano, indica como parâmetro microbiológico da água purificada para fins farmacêuticos até 100 UFC/mL para bactérias heterotróficas e ausência de algumas bactérias patogênicas, entre elas Pseudomonas aeruginosa. Estudos demonstram que a P. aeruginosa é um dos principais contaminantes microbiológicos da água pela baixa exigência nutricional, capacidade de desenvolvimento em ambientes desinfetados e formação de biofilme nos sistemas de purificação de água. A contaminação de medicamentos e cosméticos pelo micro-organismo pode gerar desde a perda da estabilidade do produto, formação de compostos tóxicos até infecção do usuário por P. aeruginosa viável presente na formulação. As metodologias disponíveis para detecção de P. aeruginosa não contemplam a necessidade amostral descrita na Farmacopéia Brasileira 5 ed. e apresentam tempo de detecção elevados para utilização do ensaio visando a liberação da água como matéria-prima. Assim, o presente trabalho propôs desenvolver meios de cultura por meio da alteração de meios de cultura já utilizados para P. aeruginosa capaz de analisar a quantidade amostral preconizada no compêndio oficial brasileiro, que seja específico, capaz de detectar a presença do micro-organismo alvo em tempo reduzido e que seja equivalente à um método oficial. Assim, desenvolveu-se um meio a partir de alterações na formulação do Ágar F. Tal meio demonstrou ser apto a analisar a quantidade de água desejada, com especificidade para P. aeruginosa. Reduziu em cerca de 50% o tempo necessário para detecção de P. aeruginosa na amostra, apresentou uma capacidade quantitativa de detecção superior ao método padrão utilizado (Ágar cetrimide), sendo equivalente ao método padrão nos ensaios de repetibilidade e reprodutibilidade. Assim, apresenta-se uma proposta inovadora, segura e confiável para a pesquisa de P. aeruginosa em águas para fins farmacêuticos.

Abstract: The purified water is one of the most important raw materials for medicines and cosmetics. In addition, it is used effectively in the wet cleaning sterilization process, in the equipment cleansing; it is also used in the analysis for quality control. Thus, directly influences the quality of products. For this reason, it is necessary to follow the quality parameters pre-established by the official compendia. The Brazilian Pharmacopoeia 5th ed., which goes into effect in February 2011, indicates, as a microbiological parameter for purified water for pharmaceutical purpose, the microbiological limit of 100 CFU/mL for heterotrophic bacteria and the absence of some pathogenic bacteria, including Pseudomonas aeruginosa. Studies show that P. aeruginosa is a major microbiological contamination of water because of their low nutrient requirements, their development capability at clean environments, and their capability to for biofilm at the water purification systems. The contamination of medicines and cosmetics by the microorganism may cause significant loss of product stability, formation of toxic compounds, as well as the infection of the user by P aeruginosa present in the formulation. The methodologies available for detection of P. aeruginosa does not contemplate the need of sampling described in the Brazilian Pharmacopoeia 5th ed., and the assay demands excessive time to release the water as raw material. Therefore, this study pretended to develop a culture medium capable of analyzing the sample amount recommended by the official compendium of Brazil, specific, presenting reduced detection time, and equivalent to the official method. The results showed that the culture medium was able to analyze the amount of water desired, with adequate specificity, as well as the time required for detection of P. aeruginosa in the sample was reduced by half, and presented a higher quantitative detection capability compared to the standard method. The repeatability and reproducibility assays were equivalent to the standard tests. Thus, it is an innovative, secure and reliable proposal for the detection of P. aeruginosa in water for pharmaceutical purposes.