Caracterização de isolados de Curvularia spp. Endofíticos de milho (Zea mays L.) por parâmetros morfológicos e moleculares

Abstract

Resumo: Fungos denominados dematiáceos causam a helmintosporiose ou manchas em diversas famílias de plantas, tendo uma grande importância para a cultura do milho. Os fungos dematiáceos do gênero Curvularia são encontrados com grande frequência em diferentes substratos vegetais, como saprofíticos, fitopatogênicos ou endofíticos, podendo ainda ser isolados a partir do solo e do ar. O presente trabalho teve como objetivo principal avaliar o potencial de plantas sadias de milho servirem como depositárias de espécies fúngicas patogênicas, especialmente a Curvularia, que é associada a diversas doenças em animais e vegetais. Foram isolados fungos de diferentes genótipos de milho, quatro parentais e três híbridos descendentes de cruzamentos destes parentais, da região de Campo Largo, PR. Também foram utilizados 22 isolados de Curvularia de Palotina, PR e dois isolados de Curitiba. Foram obtidos 23 isolados de Curvularia de três genótipos parentais: G4, G5 e G6, sendo o G5 o que forneceu o maior número de isolados (52%) e dos três genótipos híbridos (G1, G2 e G3). Do parental G7 não foi isolado Curvularia. Do híbrido G3 (G4 x G7) foi obtido apenas um isolado. Esses resultados sugerem uma colonização diferenciada para os genótipos de milho testados. A partir da caracterização morfológica foram realizados testes de Scott-Knott para agrupamento em relação ao tamanho dos conídios e crescimento micelial. Pelo comprimento do conídio foram obtidos quatro agrupamentos nos quais, os isolados de Palotina e Campo Largo estão distribuídos. Os isolados de Curitiba permaneceram no mesmo grupo. Pelo tamanho da colônia os agrupamentos foram diferentes aos 5°, 6° e 7° dias e houve uma distribuição heterogênea dos isolados. Características morfológicas foram utilizadas para compor uma matriz de dados e a árvore gerada agrupou os isolados de diferentes origens nos mesmos ramos, porém alguns com baixa sustentabilidade estatística. Foi realizado o sequenciamento das regiões ITS-5,8S-ITS2 do DNA ribossomal de 37 isolados. As sequências obtidas foram submetidas ao BLAST e analisadas pelos métodos de distância (Neighbor-Joining) e de Parcimônia. Pelo BLAST foi possível averiguar a identidade genética de todos os isolados de alotina com o Cochiobolus sp. Dezesseis isolados de Campo Largo apresentaram identidade genética acima de 90% com Cochiobolus lunatus, teleomorfo C.lunata, espécie patogênica ao homem e animais, e dois com o fitopatógeno Curvulariatrifolli, com menor identidade. Pela árvore de distância, os isolados de Palotina apresentaram menor variabilidade e ficaram distantes do grupo de Campo Largo que agrupou com uma sequência referência de Curvularia trifolli. Próximo a este grupo ainda ficaram C. gudauskasii e C. lunatus. Na árvore gerada pelo método de Parcimônia, a separação dos grupos de Campo Largo e de Palotina manteve-se. Outros ramos sofreram modificações. Foi possível verificar que por caracterização morfológica os grupos de Campo Largo e Palotina não se separaram enquanto pelos dados do sequenciamento pode-se afirmar com segurança que estes pertencem a diferentes espécies. Cinco isolados foram selecionados para um ensaio de antagonismo contra três espécies de fungos fitopatogênicos: Guignardia itricarpa, Fusarium sp. e Trichoderma sp. Todos os isolados testados apresentaram resultados significativos com as espécies ensaiadas, denotando o potencial uso no controle biológico de fitopatógenos deste fungo.