Detecção e caracterização de hemoplasmas e outros patógenos transmitidos por carrapatos em tamanduás do centro-oeste brasileiro

Abstract

Resumo: O Pantanal é uma das maiores planícies alagadas do mundo e está localizado no centro-oeste do Brasil, sendo um bioma extremamente rico e com elevada conservação ambiental. Além do Pantanal, o bioma predominante no centrooeste brasileiro é o Cerrado, considerado a savana mais rica do planeta. O tamanduá-bandeira (Myrmecophaga tridactyla) e o tamanduá-mirim (Tamandua tetradactyla) são mamíferos abundantes nestes locais e encontrados em todos os biomas brasileiros. Estas espécies, bem como outros animais selvagens, são vítimas de incêndios florestais, atropelamentos em rodovias e caça, fatores estes que contribuem fortemente para o declínio das suas populações. Além disso, estão constantemente expostos à infestação por ectoparasitos, por isso, este estudo teve como objetivo determinar o perfil sanitário dos tamanduás (M. tridactyla e T. tetradactyla) vítimas dos incêndios que afetaram o Pantanal e o Cerrado, assim como de atropelamento nas rodovias da região centro-oeste brasileira, além da da identificação e caracterização molecular dos carrapatos coletados destes animais. Foram coletadas amostras de baço e coágulo de 35 tamanduás, 46 carrapatos adultos e 15 ninfas. Foi realizada a dissecção da glândula salivar dos carrapatos adultos e as ninfas foram agrupadas em três pools de cinco cada. Todas as amostras foram submetidas a ensaios de PCR em tempo-real (qPCR) com alvo no gene 16S rRNA e ensaio de PCR convencional (cPCR) com alvo no gene RNase P para detecção de Mycoplasma spp. Adicionalmente, ensaios de cPCR foram realizados para detecção de Ehrlichia/Anaplasma spp. (genes 16S rRNA, dsb e groEL). Os carrapatos foram identificados como Amblyomma sculptum (44/46; 95,65%, 28 machos e 18 fêmeas) e Amblyomma nodosum (2/46; 4,34%, 2 M) através de chaves pictóricas. Quinze ninfas foram identificadas como sendo do gênero Amblyomma. Onze dos 35 (31,43%; 95% IC: 18,55%-47,98%) animais foram positivos para Mycoplasma spp., visando o gene 16S rRNA. Um de 35 (2,86%; 95% IC: 0,51%-14,53%) tamanduás foi positivo para o gene 16S rRNA de Ehrlichia/Anaplasma spp., porém não apresentou amplificação para o gene dsb. Doze de 35 (34,29%; 95% IC: 20,83%-50,85%) tamanduás foram positivos para o gene dsb de Ehrlichia spp., cujo sequenciamento revelou anelamento com DNA do hospedeiro. O sequenciamento dos fragmentos do gene 16S rRNA de três tamanduás positivos para Mycoplasma spp. revelou duas amostras com 99-100% de identidade com ‘Candidatus Mycoplasma haemobos’. Além disso, um pool de ninfas de Amblyomma spp. testou positivo para o gene 16S rRNA de Mycoplasma spp., confirmando o potencial vetorial dos carrapatos no ciclo de transmissão de hemoplasmas e contribuindo assim com estudos de controle sanitário e enzoótico nesta área

Abstract: The Pantanal is one of the largest flood plains in the world and is located in the central-west of Brazil. It is an extremely rich biome with a high level of environmental conservation. In addition to the Pantanal, the predominant biome in central-western Brazil is the Cerrado, considered to be the richest savannah on the planet. The giant anteater (Myrmecophaga tridactyla) and the collared anteater (Tamandua tetradactyla) are abundant mammals found in all Brazilian biomes. These species, as well as other wild animals, are victims of forest fires, roadkill and hunting, all of which contribute greatly to the decline of their populations. In addition, they are constantly exposed to ectoparasite infestation, which is why this study aimed to determine the health profile of anteaters (Myrmecophaga tridactyla and Tamandua tetradactyla) that were victims of the fires that affected the Pantanal and Cerrado, and victims of being run over on highways in the central-western region of Brazil, as well as to identify and characterize the ectoparasites collected from these animals. Spleen and clot samples were collected from 35 anteaters, 46 adult ticks and 15 nymphs. The salivary glands of the adult ticks were dissected and the nymphs were grouped into three pools of five each. All samples were analyzed by real-time PCR (qPCR) targeting the 16S rRNA gene and by conventional PCR (cPCR) targeting the RNase P gene for the detection of Mycoplasma spp. Additionally, cPCR assays were performed for the detection of Ehrlichia/Anaplasma spp. (16S rRNA, dsb and groEL genes). The ticks were identified as Amblyomma sculptum (44/46; 95.65%, 28 M, and 18 F) and Amblyomma nodosum (2/46; 4.34%, 2 M) using pictorial keys. Fifteen nymphs were identified as belonging to the genus Amblyomma. Eleven of the 35 (31.43%; 95% CI: 18.55%-47.98%) animals were positive for Mycoplasma spp. using the 16S rRNA gene. One of 35 (2.86%; 95% CI: 0.51%-14.53%) anteaters was positive for the 16S rRNA gene of Ehrlichia/Anaplasma spp., but showed no amplification for the dsb gene, whose sequencing revealed annealing with host DNA. Twelve of 35 (34.29%; 95% CI: 20.83%-50.85%) anteaters were positive for the dsb gene of Ehrlichia spp. Sequencing of the 16S rRNA gene fragments from three Mycoplasma spp. positive anteaters revealed two samples with 99-100% identity with 'Candidatus Mycoplasma haemobos'. In addition, a pool of Amblyomma spp. nymphs tested positive for the Mycoplasma spp. 16S rRNA gene, confirming the vectorial potential of ticks in the hemoplasma transmission cycle and thus contributing to sanitary and enzootic control studies in this area