Avaliação do método de cocultura bacteriana para formação de biofilme na disbiose vaginal

Abstract

Resumo: A vaginose bacteriana (VB) é o principal tipo de disbiose vaginal e acomete cerca de um terço da população feminina em idade reprodutiva. A VB é caracterizada por uma depleção de Lactobacillus spp. concomitante ao aumento da proliferação de bactérias anaeróbicas facultativas, como Gardnerella spp. Dentro deste gênero, Gardnerella vaginalis tem um destaque na patogênese de VB por ser pioneira na produção do biofilme, um importante fator de virulência bacteriana que reduz a efetividade do tratamento para VB. Neste sentido, tem-se em vista a importância do estudo do biofilme bacteriano vaginal visando dados mais comparáveis e reprodutíveis para o estudo de novas estratégias terapêuticas para VB. Assim, este trabalho teve como objetivo realizar uma revisão sistemática sobre as metodologias mais utilizadas no estudo dos biofilmes vaginais bacterianos, visando em como uma padronização desta metodologia pode facilitar o estudo do biofilme vaginal. Para isso, foi realizada uma busca por artigos disponíveis nas bases de dados Pubmed, BVS e Embase que discutem o tema dos biofilmes bacterianos vaginais na disbiose vaginal, resultando em um número final de 66 artigos incluídos. Foram excluídos os artigos não originais, artigos que abordam bactérias fora do ambiente vaginal, artigos com conteúdo fúngico e artigos que não tratam do tema biofilme na metodologia. O risco de viés dos artigos selecionados foi acessado com as ferramentas RobDEMAT para estudos in vitro e RoB2 para os estudos in vivo. Este estudo observou que o método experimental mais utilizado nos artigos foi a cultura bacteriana e as principais bactérias utilizadas nestes experimentos foram Gardnerella vaginalis e Lactobacillus spp., cultivadas mais frequentemente em meios MRS e BHI, respectivamente. Além disso, foi visto que o principal método de detecção de biofilme nos estudos foi pela coloração cristal violeta. O conhecimento estrutural do biofilme por métodos moleculares demonstrou a importância da cocultura bacteriana para o estudo dos biofilmes, considerando sua característica essencialmente polimicrobiana. Assim, notando a importância da cocultura para o estudo do papel do biofilme na VB e observando a variabilidade metodológica existente entre os estudos analisados, nosso trabalho destaca a importância de que os futuros estudos adotem um padrão de cocultura bem estabelecido visando dados reprodutíveis e comparáveis entre eles. Dessa forma, será possível aprimorar futuras investigações de tratamentos alternativos para a VB de maneira mais otimizada

Abstract: Bacterial vaginosis (BV) is the main type of vaginal dysbiosis and affects around a third of the female population of reproductive age. BV is characterized by a depletion of Lactobacillus spp. concomitant with an increase in the proliferation of facultative anaerobic bacteria, such as Gardnerella spp. Within this genus, Gardnerella vaginalis stands out in the pathogenesis of BV because it is a pioneer in the production of biofilm, an important bacterial virulence factor that reduces the effectiveness of BV treatment. It is therefore important to study vaginal bacterial biofilm in order to obtain more comparable and reproducible data for the study of new therapeutic strategies for BV. The aim of this study was to carry out a systematic review of the most commonly used methodologies for studying bacterial vaginal biofilms, with a view to how standardizing this methodology could facilitate the study of vaginal biofilms. To this end, a search was carried out for articles available in the Pubmed, BVS and Embase databases that addressed the topic of vaginal bacterial biofilms in vaginal dysbiosis, resulting in a final number of 66 articles included. Non-original articles, articles dealing with bacteria outside the vaginal environment, articles with fungal content and articles that did not deal with biofilm in their methodology were excluded. The risk of bias of the selected articles was assessed using the RobDEMAT tool for in vitro studies and the RoB2 tool for in vivo studies. This study found that the most commonly used experimental method in the articles was bacterial culture and that the main bacteria used in these experiments were Gardnerella vaginalis and Lactobacillus spp. most frequently cultivated in MRS and BHI media, respectively. In addition, it was found that the main method of biofilm detection in the studies was staining with crystal violet. The structural knowledge of the biofilm through molecular methods demonstrated the importance of bacterial coculture for the study of biofilms, considering their essentially polymicrobial characteristics. Thus, given the importance of coculture for studying the role of biofilms in BV and observing the methodological variability between the articles analyzed, our study highlights the importance of future works adopting a well-established coculture standard in order to obtain reproducible and comparable data. In this way, it will be possible to improve future research into alternative treatments for BV in a more optimized way