Presença, influência e transmissão de RNA dupla fita no fungo Metarhizium anisopliae (Metsch) Sorokin

Abstract

Resumo: RN As dupla fita (RNAdf) vem sendo descritos em fungos, estando presentes em, aproximadamente, 30% de todas as espécies. No entanto, seu significado biológico permanece incerto para a maioria destes fungos. Desta forma, o estudo da presença, influência e transmissão destes elementos no fungo entomopatogênico Metarhizium anisopliae mostrou-se de grande importância para tentar elucidar estes fatores e, assim, permitir um melhor aproveitamento deste fungo no controle biológico de pragas. RN As dupla fita foram identificados, por tratamento enzimático, em 5 linhagens das 12 estudadas. Partículas semelhantes à vírus foram observadas por Microscopia Eletrônica de Transmissão revelando tamanhos de 40 e 50nm de diâmetro. Estes RNAs dupla fita mostraram-se estáveis durante a reprodução assexual. Em presença de ciclohexamida, estes elementos não puderam ser eliminados o que não permitiu a obtenção de uma linhagem isogênica. Foi possível, ainda, caracterizar a transmissão vertical destes elementos em recombinantes obtidos de dois cruzamentos, entre uma linhagem portadora e outra não portadora de RNAdf. Tais recombinantes foram caracterizados por RAPD e coloração de núcleo de conídios. Por RAPD, os recombinantes mostraram-se semelhantes a um dos parentais, revelando que a recombinação pode estar ocorrendo de tal maneira que uma linhagem parental doa fragmentos de seu genoma à outra, os quais inserem-se no genoma do parental receptor. Pela coloração de núcleo de conídios, os recombinantes de um dos cruzamentos apresentaram alta porcentagem de conídios maiores do que o descrito para M anisopliae, sugerindo que possíveis fragmentos do parental doador tenham se inserido em genes responsáveis pela determinação do tamanho destes conídios. A presença de RNAdf não interferiu na taxa de crescimento e conidiação deste fungo. Da mesma maneira, estes elementos parecem não influenciar na virulência de M. anisopliae contra o percevejo Euschistus heros

Abstract: Double-stranded RNA (dsRNA) has been described in fungi and they are being in about 30% of all species. However, its biological meaning remains uncertain for most of these fungi. Thus, the presence, influence and transmission studies of these elements in the entomopathogenic fungus Metarhizium anisopliae presented important to try elucidate these factors and to permit a better improvement of this fungus for the biological control. Double-stranded RNAs were identified, by enzimatic treatment, in 5 of 12 strains analyzed. Virus-like particles were observed by Transmission Electronic Microscopy showing particles size among 40 and 50nm of diameter. These dsRNAs are stable during asexual reproduction. In the presence of ciclohexamide, theses elements could not be eliminated, not been possible the isogenic strain obtention. It was still possible to characterize the vertical transmission of these elements in recombinants products obtained from two crosses-breeding among a carrier strain and another strain no carrying dsRNA. These recombinants were characterized by RAPD markers and nuclei conidia staining. Through RAPD markers the recombinants were similar just to one parental strain, showing that the recombination can be occurring by donation of small fragments from one parental strain genome to another parental strain called recipient. Through nuclei conidia staining, the cross-breeding two recombinants showed high percentage of larger conidia than those described for M. anisopliae, suggesting the possibility that fragments of the donor parental strain have been inserted in responsible genes for the determination of the conidia size. The dsRNA presence did not interfere in the growth tax and conidiation of this fungus. In the same way, these elements did not interfere in the virulence of M. anisopliae against the bug Euschistus heros