Efeitos do eugenol nos mecanismos de liberação de íons cálcio do retículo sarcoplasmatico de músculo esquelético de anfíbio

Abstract

Resumo: Utilizando-se de músculo sartório intacto de rã e de fibras musculares quimicamente desmembranadas com o uso de saponina e Triton X-100, realizou-se um estudo dos efeitos do eugenol, perclorato isoladamente e em combinação no mecanismo de liberação de cálcio do retículo sarcoplasmático e no sistema contrátil. Foi observado em músculo intacto que: 1) O eugenol em concentrações entre 1 - 3 mM foi capaz de bloquear a contratura induzida por 100 mM de K+. Quando utilizou-se alta concentração de eugenol (10 mM), este composto foi capaz de induzir contração por si só tanto em solução contendo 4 mM de K+ quanto em solução contendo 100 mM de K+. O eugenol (3 mM) potencializou o efeito contraturante da cafeína (2 mM). 2) As contraturas induzidas por 40, 80 e 100 mM de K+ foram potencializadas pelo perclorato (2 mM). 3) O efeito contraturante do perclorato (0,1 à 150 mM) só se manifestou quando o músculo foi mantido numa concentração extracelular de potássio de 4 mM. A remoção do cálcio externo, não alterou estas contraturas. A procaína (10 mM) bloqueou a contratura induzida por 50 mM de perclorato. Em fibras permeabilizadas com saponina obsevou-se que: 1) O eugenol (1,5 ou 10 mM) e o perclorato (9 ou 36 mM) induziram liberação de cálcio do retículo sarcoplasmático. Estas contraturas foram bloqueadas pela procaína. Não foi observado potencialização da contratura induzida pela associação desses compostos. Em fibras permeabilizadas com Triton X-100 observou-se que: 1) O eugenol não alterou a sensibilidade do sistema contrátil ao cálcio ou a força máxima das fibras. 2) O perclorato (10 mM) aumentou a sensibilidade do sistema contrátil ao cálcio, mas não alterou a força máxima. Esses dados sugerem que: 1) O eugenol atua em dois passos do processo de acoplamento-excitação contração: na transdução do sinal entre os receptores DHP/RYR e induzindo a liberação de cálcio do retículo sarcoplasmático. 2) Em músculo intacto o efeito contraturante do perclorato é dependente do potencial de membrana. 3) Em músculo permeabilizado com saponina o perclorato atua liberando cálcio do retículo sarcoplasmático.

Abstract: The effects of eugenol and perchlorate isolated and in combination were investigated in intact sartorius muscle and in chemically skinned skeletal muscle fibers of the frog. In sartorius muscle, eugenol (0.1 - 3 mM) blocked the potassium (K+)-induced contraction, but potentiated the responses induced by caffeine (1 mM). Perchlorate (2 mM) enhanced the K+-induced contraction. Perchlorate induced muscle contraction only in preparations kept at 4 mM of potassium solution and in saponin skinned fibers. These effects were blocked by procaine. Eugenol (0.1 - 3 mM) blocked the K-induced contraction even in the presence of 2 mM of perchlorate. At 4 mM of extenal solution eugenol potentiated the contractions induced by perchlorate. At a high concentration (10 mM), eugenol induced contraction by itself. We have also observed that eugenol was able to induce calcium release in saponin-skinned fibers. This effect was blocked by procaine. Eugenol did not alter the calcium sensitivity or the maximal force in single muscle fibers permeabilized by Triton X-100. These data suggest that: (i) eugenol blocks the excitation-contraction coupling at a step before calcium release and (ii) induces calcium release from sarcoplasmic reticulum.