O uso do azul de Evans para avaliar a permeabilidade vascular na colite induzida com acido acetico a 10% em ratos Wistar

Abstract

Resumo: Este estudo tem por objetivo avaliar as alterações da permeabilidade vascular decorrentes das reações inflamatórias induzidas pelo ácido acético a 10%, em ratos Wistar, pela dosagem do azul de Evans, através de micrométodo espectrofotométrico, e correlacionar as alterações histológicas, durante um período de 36 dias. Foram utilizados 120 ratos Wistar, machos, com pesos compreendidos entre 146,1 a 336,0 g . Os animais foram subdivididos em 2 grupos: Grupo I (colite induzida) com 90 ratos que sofreram a instilação de 0,5 ml do ácido por via retal e acompanhados por 36 dias; Grupo II (controle) com 30 ratos que receberam a instilação de 0,5 ml de solução fisiológica e acompanhados por três dias. Os animais foram divididos em subgrupos de 10 ratos cada. Para a avaliação do modelo foram realizadas dosagens plasmáticas e teciduais do azul de Evans e ainda avaliação histológica do cólon nos dias 1º, 2º, 3º, 5º, 7º, 9º, 16º, 21º e 36º, para Grupo I, e nos dias 1º, 2º e 3º para o Grupo II. Todos os animais foram inoculados através da veia peniana com azul de Evans a 2,5% na dose de 20 mg/kg, 8 horas antes do período pré-determinado para o sacrifício. Nos períodos pré-determinados os animais foram submetidos a coleta de amostra de sangue para determinação plasmática do azul de Evans e após o sacrifício foram obtidos fragmentos colônicos para a determinação das concentrações do azul de Evans teciduais e avaliação histológica. Utilizou-se formamida durante 24 horas à 22°C para a extração do azul de Evans do tecido colônico. As quantificações foram efetuadas frente a uma solução padrão de azul de Evans 2,5%, em leitor de ELISA com filtro de 620 nm de comprimento de onda, com coeficiente de correlação (r) de 0,99539 para as leituras plasmáticas e de 0,98424 para as leituras em extratos de fragmentos de cólon. Os resultados das dosagens do azul de Evans dos fragmentos colônicos do Grupo I no primeiro dia foram de 97,24 µg/g de tecido, que se normalizaram no nono dia (51,64 µg/g) e manteve-se até o trigésimo sexto dia, quando comparados ao Grupo controle. Não foram observadas alterações nas concentrações plasmáticas do corante na vigência do processo inflamatório colônico induzido. Os resultados obtidos permitiram concluir que foi possível avaliar as alterações da permeabilidade vascular nas reações inflamatórias induzidas no cólon de ratos e que houve correlação (r= 0,7002) entre as alterações histológicas e as dosagens colônicas do azul de Evans tecidual.

Abstract: The aim of this study is to evaluate the changes in vascular permeability in Wistar rats due to inflammatory reaction induced by acetic acid 10 %, using Evans blue to measure this changes and to correlate the results with the histopathological patterns. One hundred and twenty males rats, were used, with body weight varying from 146,1 to 336,0 g. The animals were divided in two groups: Group I ( induced colitis group ) with 90 rats which were instilated with 0,5 ml of acetic acid through the rectum, and followed up during 36 days period. Group II ( control group ) with 30 animals which were instilated with 0,5 ml of normal saline solution and followed up by 3 days period. Both groups were subdivided in subgroups of 10 rats each. For the evaluation of this experiment model was determine the plasmatic and tissual concentrations of Evans blue plus the histological evaluation of the colon at day 1st, 2nd, 3rd, 5th, 7th, 9th, 16th, 21st and 36th of Group I and day 1st, 2nd and 3rd of group II. 20 mg/kg of 2,5% Evans blue solution was injected through the penis vein 8 hours before the time of sacrifice. In the predetermined days, the blood was withdrawn from the animals for the determination of plasmatic concentration of Evans blue and after the sacrifice, colonic samples were obtained for the determination of tissual concentration and also for histological evaluation. The extraction of Evans blue from the colonic tissue were obtained with formamide at 22°C during 24 hours. The quantification were done relating with a standard 2,5% Evans blue solution, in a ELISA reader, with 620 nm wave length filter. The correlation coefficient (r) was 0,99539 and 0,98424 for the plasmatic and colonic tissue respectively. The mean concentration value of Evans blue in colonic tissue at the first day was 97,24 ìg/g, which got to normal at 9th day ( 51,64 ìg/g ) as compare with the control Group, thereafter it estabilized until the 36th day. There was no changes in plasmatic concentrations of Evans blue during induzed acetic acid colitis. The results obtained allowed to conclude that it was possible to evaluate vascular permeability changes with Evans blue, during the induced colonic inflammatory reaction in rats and that there was correlation ( r= 0,7002 ) between the histological changes and tissue concentrations of the blue dye.