Avaliação toxicológica de alquilfenóis na linhagem celular píscea RTG-2 : uma abordagem in vitro por meio de múltiplos biomarcadores

Abstract

Resumo: Os etoxilatos de alquilfenóis são surfactantes industriais que, uma vez liberados no meio ambiente, produzem produtos secundários de sua degradação, sendo o nonilfenol (NP) e o octilfenol (OP) os mais comuns desses. Estes compostos podem ser classificados como interferentes endócrinos, já que o potencial estrogênico é amplamente reconhecido, mas outros aspectos toxicológicos ainda estão em debate. O objetivo deste estudo foi avaliar a toxicidade do NP, OP e misturas de ambos através de biomarcadores celulares, bioquímicos e genéticos em células gonadais písceas RTG-2 expostas a concentrações nominais de 0,05; 0,5; 5; 50 e 100 µg.mL-1 de cada composto químico e suas misturas, nas respectivas concentrações. Após 24 h de exposição, as células foram coletadas para as análises de citotoxicidade (vermelho neutro - VN; cristal violeta - CV, ensaio de resazurina - RA e lactato-desidrogenase - LDH), sistema antioxidante (glutationa-s-transferase - GST; superóxido-dismutase - SOD; glutationa-peroxidase - GPx e malondialdeído - MDA) e genotoxicidade (ensaio cometa alcalino e oxidativo). Ambos os compostos e suas misturas foram citotóxicos a 50 e 100 µg.mL-1 em aspecto geral, mas o LDH apresentou citotoxicidade desde 0,05 µg.mL-1. A GST e SOD apresentaram tendência de aumento em todos os grupos testados, enquanto a GPx diminuiu atividade a 5 µg .mL-1 da mistura. O aumento do MDA em todos os grupos resultou em peroxidação lipídica. As espécies reativas de oxigênio causaram danos ao DNA em todos os grupos testados. NP e OP e as concentrações testadas são encontrados em sistemas de água doce e demonstraram ser capazes de induzir toxicidade celular em diversos parâmetros que podem prejudicar os tecidos gonadais, considerando as respostas obtidas com a linhagem celular RTG-2.

Abstract: Alkylphenols ethoxylates are industrial surfactants and the releasing in the environmental matrices produce degraded products of which nonylphenol (NP) and octylphenol (OP) were the most common. They can be classified as endocrine disruptors since the estrogenic potential is widely recognized but some others toxic aspects are in discuss. The aim of this study was to evaluate the toxicity of NP, OP and mixtures of both through cellular, biochemical and genetic biomarkers in gonadal piscean cell line RTG-2 exposed to nominal concentrations of 0.05; 0.5; 5; 50 and 100 µg.mL-1 of each chemical and its mixtures of respectively concentrations. After 24 h, the cells were collected for cytotoxic (neutral red – NR; crystal violet - CV, resazurin assay – RA and lactate-dehydrogenase - LDH), antioxidant system (glutathione-s-transferase – GST; superoxide-dismutase – SOD; glutathioneperoxidase – GPx and malondialdehyde – MDA) and genotoxic assays (alkaline comet assay and Fpg-modified alkaline comet assay). The chemicals and its mixtures were cytotoxic at 50 and 100 µg.mL-1 in general aspect but LDH showed cytotoxicity since 0.05 µg.mL-1.. The GST and SOD showed an increase trend in most tested groups while GPx decreased at 5 µg.mL-1 of mixture. The MDA increase in all groups resulting in lipid peroxidation. The reactive oxygen species caused DNA damage for all groups. The tested chemicals and concentrations have been found in the freshwater systems and are capable to induce cell toxicity in several parameters that could impair the gonadal tissues considering the RTG-2 responses.