Estratégia de solubilização de CD28 recombinante e sua interação com macrófagos de aves

Abstract

Resumo: O sistema imune precisa distinguir entre o próprio e o não-próprio para fornecer proteção contra patógenos que eventualmente invadem os nossos tecidos. Para esta distinção de fato acontecer é necessária uma comunicação entre células apresentadoras de antígenos (APCs) e células T. Esta comunicação acontece a partir da aproximação das duas células e consequentemente das suas membranas e interação receptor-receptor, formando uma zona de contato chamada de sinapse imunológica. Com esta interação os linfócitos T são ativados, entram num processo de proliferação e se diferenciam dentro de um conjunto de células efetoras. Para esta ativação de fato acontecer, são necessários dois sinais. O primeiro é fornecido através da ligação do peptídeo-MHC e o receptor do linfócito T (TCR) e o segundo pelas proteínas co-estimulatórias, especialmente as proteínas da família B7 (CD80 e CD86) na membrana das APCs, e CD28 na célula T. Um motivo altamente conservado em CD28, o motivo MYPPPY, é responsável pela interação com as proteínas B7. Recentemente estudos têm mostrado que esta ativação pode ser bidirecional, ou seja, durante esse processo a célula APC também é ativada. Até o momento a interação CD28-B7 em macrófagos de aves não foi descrita na literatura. Portanto, este estudo pretende investigar essa sinalização e determinar se ela foi conservada durante a evolução, além de fornecer dados que possam ser úteis no manejo de aves de corte, particularmente em possíveis abordagens de investigação diagnóstica e de aumento de produtividade. Este trabalho tem como objetivo avaliar a ativação de macrófagos de frango frente ao estímulo com CD28 recombinante. O gene que codifica a proteína CD28 foi clonada em um sistema bacteriano e purificada. Pelo fato de apresentar característica de formação de corpos de inclusão, diferentes condições de solubilização foram testadas neste trabalho. Foi possível estabelecer com sucesso um procedimento capaz de manter a proteína recombinante solúvel em condições químicas compatíveis com as diferentes abordagens experimentais tipicamente empregadas pelo grupo. Os estudos de interação de chCD28 com B7 foram realizados utilizando uma linhagem imortalizada de macrófagos de galinha (macrophage-like cell line HD11). Os resultados sugerem que o mecanismo de ativação parece ter sido conservado em aves, pois a molécula CD28 reconhece os receptores da família B7, CD80 e CD86, presentes na superfície dos macrófagos de aves.

Abstract: The immune system needs to distinguish between itself and non-self to provide protection against pathogens that eventually could invade our tissues. For this, a communication between antigen-presenting cells (APCs) and T cells is necessary. This communication happens from the approximation of the two cells and consequently their membranes and receptor-receptor interaction, forming a contact zone called immunological synapse. T lymphocytes are activated with this kind of communication, entering into a proliferation process and differentiating within a set of effector cells Two signals are required for this activation. The first one is provided via MHC-peptide and T lymphocyte receptor (TCR) and the second by costimulatory proteins, especially the B7 family proteins (CD80 and CD86) on the APCs membrane, and CD28 in the T cell. A highly conserved motif in CD28 (MYPPPY) is responsible for the interaction with the B7 proteins. Recently studies have shown that this activation can be bidirectional, resulting in the stimulation of the APC. To date, CD28-B7 interaction in avian macrophages has not been described in the literature. Therefore, this study intends to investigate this signaling and to determine if it has been conserved during the evolution, besides providing data that can be useful in the handling of poultry, particularly in possible approaches of diagnostic, investigation and increase of productivity. This work aims to evaluate the activation of chicken macrophages against the stimulation with recombinant CD28. The gene encoding the CD28 protein was cloned into a bacterial system. Due to the presence of inclusion body formation, different solubilization conditions were tested. A procedure capable of keeping the recombinant protein soluble under chemical conditions, compatible with the different experimental approaches was successfully established. Interaction studies of chCD28 with B7 were performed using an immortalized line of macrophage-like cell line-HD11. The results suggest that the mechanism of activation seems to have been conserved in chicken since the CD28 molecule recognizes the B7, CD80 and CD86 family members present on the surface of chicken macrophages.