Subsídios para o estabelecimento e cultivo in vitro de Bambusa oldhamii Munro : estudos de microrganismos associados e aspectos morfoanatômicos
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Data
2019Autor
Pasqualini, Ana Paula de Azevedo, 1979-
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Resumo: Bambusa oldhamii Munro é uma espécie promissora de bambu, que apresenta diversas aplicações na indústria madeireira e alimentícia, porém seu uso como matéria-prima no Brasil tem sido limitado pela falta de mudas que deem suporte a plantios comerciais. Sendo assim, a micropropagação a partir de segmentos nodais mostra-se como uma alternativa propícia na obtenção de mudas sadias, de alta qualidade, em um curto espaço de tempo. Entretanto, a aplicação dessa técnica de propagação vegetativa é dificultada pela incidência de microrganismos endofíticos, especialmente quando se utiliza como fonte de explantes, matrizes cultivadas no campo. Neste sentido, os objetivos desse trabalho foram micropropagar, identificar contaminantes associados e caracterizar estruturas morfoanatômicas desenvolvidas a partir de segmentos nodais de brotações laterais de matrizes de B. oldhamii cultivadas no campo. Os estudos realizados permitiram desenvolver uma técnica de desinfestação de brotos maduros de B. oldhamii originados do campo, utilizando imersão em tiofanato-metílico, álcool 70%, cloreto de mercúrio, hipoclorito de sódio e cultivo submerso em meio Murashige e Skoog líquido, acrescido de 4 mL L-1 de Plant Preservative Mixture (PPMTM). As análises moleculares de microrganismos isolados de segmentos nodais cultivados in vitro possibilitaram identificar a presença de bactéria endofítica agrupada filogeneticamente com Ralstonia pickettii e fungos associados, com sequencias similares a Wojnowiciella leptocarpi, Diaporthe sp., Diaporthe novem, Phaeosphariaceae sp., Leptosphaeria sp., Phoma herbarum, Fusarium sp., Fusarium graminearum, Arthrinium kogelbergense e Arthrinium. Os estudos de organogênese mostraram que o maior número de brotos por segmento nodal é obtido em explantes de 2 cm de comprimento e 5-7 mm de diâmetro, após cinco subcultivos na presença de 4,4 yM de TDZ e que o uso do BAP no meio de cultura reduz o desenvolvimento de brotos. As análises morfoanatômicas dos explantes possibilitaram caracterizar o sistema de revestimento, córtex, feixes vasculares e medula e também a presença de zonas meristemáticas, com brotos pré-formados potencialmente aptos ao desenvolvimento. Deste modo, os resultados obtidos fornecem subsídios para o estabelecimento in vitro de B. oldhamii a partir de segmentos nodais de matrizes cultivadas no campo. Abstract: Bambusa oldhamii Munro is a promising species of bamboo, presenting several applications for timber and food industry. However, in Brazil, its use as a raw material has been limited by the lack of seedlings for commercial plantations. The micropropagation through nodal segments is a promising alternative in obtaining healthy seedlings of high quality, in a short time. However, the application of this vegetative propagation technique is hindered by the incidence of endophytic microorganisms, especially when using explants from matrices cultivated in the field. The aims of this study were to micropropagate, identify associate contaminants and characterize morphoanatomic structures developed from nodal segments of lateral shoots of B. oldhamii matrices grown in the field. The studies carried out allowed the development of a disinfestation technique of mature shoots of B. oldhamii from the field using thiophanate methyl, 70% ethanol, sodium hypochlorite, mercuric chloride and immersion in Murashige e Skoog liquid culture medium, plus 4 mL.L-1 of Plant Preservative Mixture (PPMTM). The molecular analyzes of microorganisms isolated from nodal segments cultured in vitro allowed to identify the presence of endophytic bacteria phylogenetically grouped with Ralstonia pickettii and several fungi with sequences similar to Wojnowiciella leptocarpi, Diaporthe sp., Diaporthe novem, Phaeosphariaceae sp., Leptosphaeria sp., Phoma herbarum, Fusarium sp., Fusarium graminearum, Arthrinium kogelbergense and Arthrinium arundinis. Organogenesis studies showed that the highest number of shoots per nodal segment is obtained in explants of 2 cm in length and 5-7 mm in diameter in the presence of 4.4 yM of TDZ after five subcultures and that the use of BAP in the culture medium reduces shoot development. The morpho-anatomical analysis of the explants allowed to characterize the coating system, cortex, vascular bundles and pith, as well as the presence of meristematic zones with preformed buds potentially suitable for development. The results obtained provide support for the in vitro establishment of B. oldhamii from nodal segments of matrices cultivated in the field.
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