Envolvimento das cininas na psoríase induzida por Imiquimod

Abstract

Resumo: As cininas são peptídeos vasoativos associados a uma ampla gama de efeitos fisiológicos e fisiopatológicos, sendo seus efeitos atribuídos à ativação de receptores específicos denominados B1 e B2. Estudos mostraram que os constituintes do sistema de cininas são constitutivamente expressos na pele, assim como, receptores e níveis de cininas são regulados positivamente durante distúrbios cutâneos. Contudo, apesar das evidências, o papel das cininas nas doenças inflamatórias da pele é pouco compreendido. Nosso grupo já demonstrou que os receptores cininérgicos estão envolvidos no controle do processo hiperproliferativo de queratinócitos. No entanto, não está claro como as cininas modulam os parâmetros inflamatórios observados na psoríase. Assim, o presente estudo teve como objetivo avaliar a relevância das cininas no desenvolvimento e progressão da psoríase. Para alcançar os objetivos propostos, camundongos C57BL/6 wild type (WT) e nocautes para os receptores das cininas (KOB1, KOB2 e KOB1B2) foram submetidos ao modelo de inflamação crônica tipo psoriática induzida por Imiquimod (IMQ). Adicionalmente, animais C57BL/6 WT foram tratados com antagonistas seletivos não-peptídicos para os receptores de cininas (SSR240612C ou FR173657) ou Captopril (inibidor da cininase II, ECA). Os resultados obtidos mostraram que ambos os receptores cininérgicos (B1 e B2) estão presentes constitutivamente na pele de camundongos, assim como, é observado o aumento significativo destes receptores após 6 dias de tratamento com IMQ. Além disso, foi observado que o silenciamento dos receptores B1 e B2, pelo nocaute do gene, promoveu melhora das características morfológicas e histológicas da psoríase induzida por IMQ, quando comparados ao grupo WT. Esse efeito protetor foi associado à reduções significativas no número de queratinócitos indiferenciados e em proliferação, menor celularidade dérmica (menor infiltrado de neutrófilos, macrófagos e linfócitos T CD4+), além de menor acúmulo de IL-17 nas lesões psoriáticas. Além disso, o silenciamento do receptor B2, mas não do receptor B1, reduziu o infiltrado de células T CD8+ na pele psoriática. Adicionalmente, a ausência dos receptores cininérgicos promoveu efeito protetor ao prevenir o aumento do peso de órgãos linfóides (baço, linfonodos inguinais e axilares), efeito sistêmico induzido pela aplicação tópica de IMQ. Corroborando estes achados, animais tratados com o antagonista do receptor B1 (SSR240612C) ou com o antagonista do receptor B2 (FR173657) das cininas apresentaram resultados semelhantes aos observados com animais nocautes no modelo de psoríase experimental induzido por IMQ. Em contraste, animais que receberam Captopril, ao longo do protocolo experimental, apresentaram exacerbação do processo psoriático induzido por IMQ. Sendo observado aumento da hiperplasia epidermal (com mais queratinócitos hiperproliferativos e indiferenciados), aumento do influxo de células inflamatórias (maior infiltrado de neutrófilos e macrófagos), além de acentuado acúmulo de IL- 17, quando comparado ao grupo veículo (salina + IMQ). Alterações similares foram observadas na avaliação de efeitos sistêmicos induzidos por IMQ, onde Captopril (100 mg/Kg) intensificou o aumento do peso do linfonodo axilar. Por fim, foi verificado que a melhora do processo inflamatório tipo psoriático, decorrente do nocaute e bloqueio dos receptores de cininas, refletiu-se no comportamento de bem-estar dos camundongos. Em contrapartida, Captopril promoveu a piora do quadro psoriático e, consequente, redução do bem-estar animal. Assim, os dados obtidos reforçam o envolvimento do sistema de cininas na psoríase, sugerindo participação de ambos os receptores cininérgicos na exacerbação do processo inflamatório crônico. Adicionalmente, os resultados sugerem que os receptores B1 e B2 podem constituir alvos terapêuticos potencialmente relevantes para o tratamento da psoríase. Palavras-chave: Cininas, Psoríase, Receptores Cininérgicos, Receptor B1, Receptor B2.

Abstract: Kinins are vasoactive peptides associated with a wide range of physiological and pathophysiological effects, and their effects are attributed to the activation of specific receptors called B1 and B2. Studies have shown that all kinin system constituents are constitutively expressed in the skin, as well as, receptors and kinins levels are upregulated during cutaneous disorders. However, despite the evidence, the role of kinins in inflammatory skin diseases is poorly understood. Our group has already demonstrated that kinin receptors are involved in the control of the keratinocyte hyperproliferative. However, it is unclear how the kinins modulate the inflammatory parameters observed in psoriasis. Thus, the present study aimed to evaluate the relevance of kinins in the development and progression of psoriasis. To achieve the proposed objectives, C57BL/6 wild type (WT) and kinin receptors knockout (KOB1, KOB2 and KOB1B2) mice were subjected to the Imiquimod (IMQ)-induced mouse model of psoriasis. In addition, C57BL/6 WT animals were treated with selective non-peptidic antagonists for kinin receptors (SSR240612C or FR173657) or Captopril (kininase II inhibitor, ACE). The results showed that both kinin receptors (B1 and B2) are constitutively present in the mice skin, as well as a significant increase of these receptors is observed after 6 days of IMQ treatment. In addition, was observed that lack of B1 and B2 receptors, by gene knockout, promoted improvement in the morphological and histological hallmark symptoms of psoriasis induced by IMQ, when compared to the WT group. This protective effect was associated with significant reductions in the number of undifferentiated and proliferating keratinocytes, lower dermal cellularity (reduction of neutrophil, macrophages and CD4+ T lymphocytes infiltrate), and lower IL-17 accumulation in psoriatic lesions. In addition, the absence of B2 receptors, but not the B1 receptor, reduced the CD8+ T cell infiltrate in the psoriatic skin. Additionally, the absence of the kininergic receptors promoted a protective effect by preventing the lymphoid organs weight increase (spleen, inguinal and axillary lymph nodes), systemic effect induced by IMQ. Corroborating these findings, animals treated with the B1 receptor antagonist (SSR240612C) or the B2 receptor antagonist (FR173657) showed similar results to those observed with knockout animals in the experimental IMQ-induced psoriasis model. In contrast, animals treated with Captopril, throughout the experimental protocol, had exacerbation of the psoriatic process IMQ- induced. The results showed increase in epidermal hyperplasia (large hyperproliferative and undifferentiated keratinocytes), inflammatory cells influx (large neutrophil and macrophages infiltration) and high IL-17 accumulation, relative to the vehicle group (saline + IMQ). Similarly, Captopril (100 mg/Kg) intensified the axillary lymph node enlargement IMQ-induced. Finally, was verified that the improvement of the psoriatic process, due to the kinin receptor knockout and blockade, was reflected in the well-being mice behavior. On the other hand, Captopril promoted worsening of the psoriasis and negative animal welfare impacts. Thus, the data obtained reinforce the involvement of the kinin system in psoriasis, suggesting the participation of both kininergic receptors in the chronic inflammatory process exacerbation. In addition, the results suggest that B1 and B2 receptors may be potentially relevant therapeutic targets for the treatment of psoriasis. Keywords: Kinin, Psoriasis, Kininergic Receptors, Receptor B1, Receptor B2.