Caracterização funcional da dinamina do Trypanosoma cruzi

Abstract

Resumo: O protozoário parasita Trypanosoma cruzi é o agente etiológico da doença de Chagas, uma doença humana transmitida por vetor e com alta prevalência na América Latina. Para sua eficiente sobrevivência, T. cruzi capta nutriente, por uma via dependente de receptor (endocitose), no ambiente em que se encontra hospedado. Sabe-se que as dinaminas clássicas tem um importante papel nesse processo. Outros membros da superfamília das dinaminas participam, além da endocitose, de vários outros eventos celulares tais como fissão e fusão de organelas, citocinese e também estão envolvidas na resistência a infecções virais em vertebrados. Nosso objetivo principal é caracterizar a função de TcDLP utilizando diversas abordagens em biologia celular e molecular. TcDLP compartilha características biofísicas com suas homólogas presente em outros organismos. A proteína se localiza principalmente nas regiões que ocorrem endocitose (bolsa flagelar e complexo citóstoma/citofaringe) e está expressa durante todo o ciclo de vida do parasita. Não foi possível obter o mutante Tcdlp-nulo, sugerindo que o gene codificador da proteína TcDLP é um gene essencial. A cepa simples nocaute expressa TcDLP em menor quantidade quando comparado com a cepa selvagem, mas essa diminuição na quantidade de proteína não causa uma aparente alteração celular. Utilizando mutações dominante negativo, foi observado alterações celulares tais como alterações morfológicas, alargamento da mitocôndria e do complexo de Golgi e alteração no ciclo celular.

Abstract: The protozoan parasite Trypanosoma cruzi is the causative agent of Chagas disease, a highly prevalent vector-borne human disease in Latin America. For efficient survival, T. cruzi is dependent on receptor-mediated uptake of nutrients (endocytosis) from the host environment. It has been well studied the role of classical dynamins in that process. Other dynamin superfamily members appear to participate in a large subset of intracellular reactions, such as endocytosis, organelles fusion and fission, cytokinesis and resistance to viral infections in vertebrate. Our main goal is to characterize the TcDLP function using several approaches in cell and molecular biology. TcDLP shares common biophysical characteristics with its homologs in other organisms. The protein localizes mostly in regions that occur endocytosis (flagellar pocket and cytostoma/cytopharynx complex) and is expressed during all life cycle forms of the parasite. It was not possible to obtain the Tcdlp-null mutant, suggesting that TcDLP encoding gene is essential. Deletion of a single allele of the tcDLP gene was not sufficient to cause cellular changes. By dominantnegative mutations was observed some cellular alterations such as morphological changes, mitochondria and Golgi apparatus enlargement, and abnormal cell cycle.