Avaliação da presença e quantificação em porcentagem da galectina-1 no esôfago de Barrett sem displasia, através de sistema informatizado de análise de imagem
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Data
2000Autor
Ribas, Carmen Austrália Paredes Marcondes
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Resumo: Atualmente considera-se esôfago ou epitélio de Barrett a condição pela qual o epitélio escamoso do esôfago e substituído pelo epitélio colunar especializado,o qual se caracteriza pela presença de células caliciformes tanto no epitélio de revestimento como no epitélio glandular. O esôfago de Barrett e o único fator de risco bem documentado para o desenvolvimento de adenocarcinoma do esôfago distai, o que explica a ênfase dada a essa condição pré-maligna. Existe considerável grau de subjetividade e discordância interobservadora e intraobservadora neste diagnostico. O progresso no conhecimento da biologia molecular pode permitir o aperfeiçoamento diagnostico nesta patologia. Com o objetivo de analisar novos parâmetros para complementar o diagnostico convencional das metaplasias, utilizou-se uma amostra inicial constituída de 86 biopsias endoscópicas de esôfago de Barrett,as quais foram reavaliadas independentemente por dois patologistas pelos critérios que caracterizam o esôfago de Barrett sem displasia. Após a confirmação dos laudos a amostra final foi de 60 blocos de parafina contendo esôfago de Barrett, com ausência de displasia. O restante excluído não apresentava material suficiente para a realização de novos cortes histológicos, apresentavam os tecidos sobrepostos na lamina em estudo ou material inadequadamente conservado.. Realizou-se a técnica de coloração imunohistoquimica utilizando-se o anticorpo primário policlonal de coelho-IgG anti galectina-1 e anticorpo secundário biotinilado policlonal anti IgG de coelho. O padrão de expressão da galectina 1 foi avaliado imunohistoquimicamente nas diferentes estruturas deste epitélio. A quantificação da coloração foi realizada através da citometria de imagem, pelo sistema informatizado de analise SAMBA 4000. Foram computadorizadas três variáveis: índice de mareagem, densidade optica media e heterogeneidade da amostra. Os resultados obtidos revelaram positividade de expressão do marcador utilizado nas seguintes estruturas analisadas: epitélio de revestimento, epitélio glandular e tecido conjuntivo. A diferença da media do índice de mareagem do epitélio de revestimento e tecido epitelial glandular teve um valor extremamente significante (p = 0.0004), o mesmo ocorrendo quando avaliava-se a diferença do índice de mareagem entre tecido epitelial glandular e tecido conjuntivo (p = 0.0001). Em relação a diferença de densidade óptica media entre tecido epitelial glandular e tecido conjuntivo foi considerada significante (p = 0.0001) como também foi significante esta diferença entre tecido epitelial de revestimento e tecido conjuntivo. Concluiu-se que o sistema SAMBA 4000 permite a analise quantitativa do marcador de maneira subjetiva, as quais passam a não depender unicamente da apreciação do investigador, este método pode ser utilizado em rotinas laboratoriais como técnica auxiliar no diagnostico do esôfago de Barrett sem displasia. Abstract: Nowadays, Barrett's oesophagus or epithelium is considered to be the condition in which stratified squamous epithelium is replaced by specialised columnar epithelium. Barrett's oesophagus is the only well-documented risk factor in the development of Barrett's adenocarcinoma, which explains the emphasis given to this pre-malignant condition. Diagnosis involves a high level o f both inter-observer and intra-observer subjectivity and discordance. The progress in Molecular Biology knowledge may allow both diagnostic and therapeutic perfection o f this pathology. With the objective o f analysing new parameters to complement the conventional diagnosis o f metaplasias, a sample made up of 60 paraffin blocks containing dysplasia-absent Barrett's epithelium, was used. The expression standard Galectina 1 was examined immunohistochemically in the different structures o f the epithelium. The staining quantification was carried out by image cytophotometry, using the computerised analysis system SAMBA 4000. Three variables were computed: labelling index, mean optical density and sample heterogeneity. The results obtained revealed positiveness o f expression o f the marker used in all the analysed structures. The difference in the labelling index averages of the covering epithelium and the glandular epithelial tissue was o f an extremely significant value (p = 0.0004), the same occurring when the difference in the labelling index averages o f the glandular epithelial tissue and the conjunctive tissue (p = 0.0001) was evaluated. In relation, the difference in the mean optical density of the glandular epithelial tissue and the conjunctive tissue was considered to be significant (p = 0.0001) as was the difference between covering epithelial tissue and conjunctive tissue. It was concluded that image cytophotometry is an effective auxiliary diagnostic method for quantifying immunohistochemical markers.
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