Cultivo de células da retina de peixes antárticos da família Nototheniidae em meios de cultura suplementados com diferentes fatores de crescimento

Abstract

Resumo: O cultivo in vitro de células de peixes diferem na intensidade de adesão de acordo com o tecido, órgão e o substrato utilizado. Em parte, essa característica difere também entre linhagens celulares nas condições de cultura, meio e temperatura, afetando ou dificultando as células a se dispersarem e aderirem às superfícies dos frascos. O objetivo principal do presente trabalho de pesquisa foi o de otimizar as condições de meios de cultura para o cultivo primário das células da retina de três espécies de peixes antárticos da Família Nototheniidae. Para tal propósito, um conjunto inicial de experimentos foi levado a efeito na Estação Antártica Comandante Ferraz. Amostras de retina obtidas de Notothenia neslecta, de Nototheniops nudifrons e de Trematomus newnesi, foram processadas, congeladas e mantidas em nitrogênio líquido e, então, transportadas para o Laboratório de Piscicultura, Setor de Ciências Agrárias da Universidade Federal do Paraná. As células foram então submetidas à cultura primária em diferentes meios - DMEM, 199, FIO e L15, suplementados com soro fetal bovino, insulina ou humor vítreo de peixe. Quando cultivadas as temperaturas de 4o e 15°C, a viabilidade celular foi significativamente maior a 4°C. Verificou-se também, que o humor vítreo influencia de modo positivo, a viabilidade das células da retina em cultivo quando comparado aos demais fatores de crescimento. Dos meios utilizados, o 199, o FIO e o L15 foram os mais eficientes em relação à viabilidade e à adesão celular, enquanto que, o meio DMEM mostrou-se menos viável para o cultivo destas células. E fundamental ressaltar no presente trabalho, o importante achado em relação ao humor vítreo, pela primeira vez utilizado como suplemento nutricional para o crescimento e manutenção in vitro de células da retina.

Abstract: The fish cells culture in vitro differs in the intensity of adhesion according to the tissue, organ and the substratum. This feature differs also among cells lines in culture conditions, medium and temperature, affecting or difficulting the cells to spread and to adhere to the surfaces of the bottles. The main aim of the present research was to optimize the conditions of culture medium for the primary culture of the retina cells of three species of Antarctic fishes of the Nototheniidae family. For such purpose, an initial set of experiments was accomplished in the Antarctic Station Commander Ferraz. Samples of retina were taken of Notothenia. neglecta, Nototheniops nudifrons and Trematomus newnesi. They had been processed, frozen and kept in liquid nitrogen and then transported to the Psiculture Laboratory of the Federal University of Paraná. The cells were submitted to the primary culture in different medium - DMEM, 199, FlO and L15, supplemented with fetal bovine serum, insulin or fish humor vitreous of fish. When cultivated the temperatures of 4°C and 15°C, the cellular viability was significantly higher at the 4°C. It was also verified, that the humor vitreous influenced in a positive way, the viability of the retina cells in the culture when compared to the other growth factors. The 199, FlO and L15 of all the medium were the most efficient in relation to the viability and the cellular adhesion, while, the medium DMEM showed to be less viable for these cells culture. It is fundamental to make note worthy in this research the important finding in relation to the humor vitreous, for the first time used as nutritional supplement for the growth and maintenance in vitro of retina cells.