Estudo sobre a preservação de eritrócitos humanos para emprego em exames imuno-hematológicos e controle de qualidade para contagem de reticulóticos

Abstract

Resumo: Em hemoterapia há necessidade de triagem e identificação adequadas de antígenos eritrocitários e de seus anticorpos correspondentes, presentes no plasma de pacientes e ou doadores, tanto para a seleção de sangue apropriado para transfusão como para a investigação de reações transfusionais, da doença hemolítica do recém-nascido e de outras doenças imuno-hemolíticas, assim como em imuno-hematologia. A pesquisa de anticorpos específicos demanda a aquisição de hemácias fenotipadas preservadas. Também é de grande relevância a obtenção de amostras controle de eritrócitos para contagem de reticulócitos, exame de rotina em análises clínicas, reconhecidamente útil para avaliação da integridade funcional da medula óssea, contribui para o diagnóstico e a monitoração de doenças hematológicas. O meio de conservação de eritrócitos (meio CE), solução isosmolar contendo Na2HPO4, glicose, EDTANa2, KCl, NaCl, citrato de sódio e albumina bovina, pode ser utilizado para o controle de qualidade no laboratório de análises e mantém os valores do eritrograma estáveis por cerca de 60 dias. Esta pesquisa teve como objetivo estudar a estabilidade da reatividade de antígenos eritrocitários preservados em meio CE; e da contagem de reticulócitos, em amostras conservadas em meio CE após fixação parcial com glutaraldeído. Para a pesquisa de antígenos foram separadas amostras de 10 ml de sangue venoso de doadores do Centro de Hemoterapia e Hematologia do Paraná (HEMEPAR), adicionadas ao meio CE, obtendo-se suspensão 40% e armazenadas em alíquotas à temperatura de 2 a 6 ºC. Os eritrócitos foram testados semanalmente até 63 dias, em relação à reatividade dos antígenos eritrocitários: A, B, D, Cw, C, c, E, e, K, k, kpb, Jka, Jkb P1, Lea, Leb, Lub, M, N, S, s, Fya, Fyb e Dia. A metodologia utilizada foi à reação com anticorpos específicos, através de técnica em gel. Para avaliar a contagem de reticulócitos, foram coletados 9 ml de sangue venoso de indivíduos adultos de ambos os sexos, selecionados aleatoriamente entre alunos e funcionários da UFPR, adicionados ao meio CE na proporção 3:1, parcialmente fixados em glutaraldeído 14 mmoles/l por homogeneização constante durante 60 minutos e posterior ressuspensão em meio CE. As amostras foram armazenadas em alíquotas à temperatura de 2 a 6 ºC. As contagens de reticulócitos foram realizadas semanalmente até 28 dias em equipamento Pentra DX 120 (HORIBA). Os resultados mostraram que o meio CE preservou a reatividade dos antígenos eritrocitários por 63 dias, embora decréscimo de um grau da reatividade tenha sido observado para os antígenos K, k, Lea, S e s, após 21, 14, 14, 42 e 42 dias, respectivamente. Em relação à conservação dos reticulócitos, os resultados obtidos indicam variações não significativas (1,8%±0,64), o erro casual para contagem, calculado pelo coeficiente de variação, foi de 20% em 28 dias de preservação, dentro do esperado pela metodologia. Os resultados obtidos apontam para a necessidade de novos experimentos e permitem sugerir que o meio CE pode ser indicado para a preservação de antígenos eritrocitários e de reticulócitos, o que poderá contribuir para a melhoria do controle de qualidade em laboratório.

Abstract: In hemotherapy triage and adequate identification of erythrocyte antigens is required, as well as their corresponding antibodies present in plasma of patients and donors either for the selection of appropriate blood for transfusion or for research requirements for transfusional reactions, hemolytic disease of newborn and other immuno-hemolytic diseases or immune-hematology. The investigation for specific antibodies requires the attainment of phenotyped and preserved red blood cells. It is also of great relevance to obtain control samples for reticulocyte count, a routine examination in clinical analyses, recognizably useful for assessing the functional integrity of bone marrow, aiding in the diagnosis and monitoring of hematological diseases. The medium for conservation of erythrocytes (CEmedium), an isosmolar solution containing Na2HPO4, glucose, EDTANa2, KCl, NaCl, sodium citrate and bovine serum albumin, can be used for quality control in the laboratory analysis since it maintains the values of erythrogram stable for about 60 days. The aim of this work was the studies on the use of the CE-medium for preservation of the erythrocyte antigens reactivity and the stability of reticulocyte count, after partial fixation with glutaraldehyde. For antigens, it were separated samples 10 ml of venous blood from donors of the Hematology and Hemotherapy Center of Paraná (HEMEPAR), added to CE-medium, yielding 40% suspension and stored in aliquots at temperature 2-6 ° C. The eryt hrocytes were tested weekly for 63 days for the red cell antigens reactivity of A, B, D, Cw, C, c, E, e, K, k, kpb, Jka, Jkb P1, Lea, Leb, Lub, M, N, S, s, Fya, Fyb and Dia. The methodology used was the reaction with specific antibodies by gel technique. To evaluate the reticulocyte count, were collected 9 ml of venous blood of individuals adults of both sexes, randomly selected among students and employees of UFPR, added to the CEmedium in the ratio 3:1, partially fixed in glutaraldehyde 14 mmol / l for constant mixing for 60 min and subsequent resuspension in the CE-medium. The samples were stored in aliquots at temperature 2-6 ° C. Ret iculocyte counts were performed weekly for 28 days in equipment Pentra DX 120 (HORIBA). The results obtained showed that the CE-medium has preserved the red cell antigens reactivity until 63 days, although a decrease in one score of reactivity was observed for antigens K, k, Lea, S s, after 21, 14, 14, 42 and 42 days, respectively. Regarding the conservation of reticulocytes, the results indicate no significant variations (1.8% ± 0.64, cv = 20%) compared to the start of preservation, when there was exactly the same average. The results point to the need for new experiments and to suggest that the CE-medium can be indicated to the preservation of reticulocytes and red cell antigens, and may contribute to the improvement of the quality control laboratory.