Concentrações séricas e polimorfismo de MBL e MASP-2 em pacientes com artrite reumatóide e familiares

Abstract

Resumo: A artrite reumatóide (AR) é uma doença autoimune inflamatória que afeta aproximadamente 1% da população mundial e possui elevado impacto socioeconômico. A lectina ligante de manose (MBL) e a serina protease 2 associada à MBL (MASP-2) fazem parte da via das lectinas do sistema complemento e são proteínas-chaves na manutenção da homeostasia do organismo. As concentrações séricas de MBL e MASP-2 são reguladas por polimorfismos de nucleotídeo único nos genes MBL2 e MASP2, respectivamente. Concentrações séricas e polimorfismos de MBL já foram associados à suscetibilidade e prognóstico para a AR em algumas populações. Investigações sobre o papel de MASP-2 na AR são escassas. O presente estudo objetivou investigar as concentrações séricas de MBL e MASP-2, e os polimorfismos de MBL2 e MASP2 em pacientes com AR e familiares e verificar a associação com aspectos clínicos da doença. Foram estudados 209 pacientes com AR, 200 familiares de pacientes e 421 indivíduos sadios. Os polimorfismos -221 (H/L) e -550 (X/Y), presentes no promotor de MBL2, +4 (P/Q) na região 5' não traduzida e as variantes A/D/B/C do exon 1 foram investigados através de sequenciamento gênico. Também foram investigados os polimorfismos presentes no promotor (-175C>A) e nos exons 3 (p.R99Q, p.D120G, p.P126L), 10 (p.D371Y, p.V377A) e 12 (p.R439H), e no intron 9 (+16060C>T) do gene MASP2, por meio de PCR, utilizando sequências específicas de iniciadores. As concentrações séricas de MBL e MASP-2 foram quantificadas por meio de ELISA. Foi observada associação entre concentrações diminuídas de MBL e MASP-2 e o desenvolvimento da AR em nosso meio (P=0,004 e P<0,0001, respectivamente). O haplótipo LYPB para MBL2 apresentou associação com o risco de desenvolvimento da doença (OR=1,28 [95%IC1,04-1,60] P=0,018), enquanto haplótipos LXPA foram mais frequentes em pacientes anti-CCP positivos (OR=2,42 [95%IC1,04-5,60] P=0,036). Os haplótipos *2A1 e *2B1 apresentaram associação com risco aumentado para AR para MASP2 (OR=6,0 [95%IC1,27-28,6] P=0,02; OR=2,2 [95%IC1,29-3,6], P=0,004, respectivamente). As variantes p.120G e p.439H de MASP2 aumentaram em 5,13 vezes o risco de sintomas articulares em familiares de pacientes com AR (P=0,02), sendo que familiares com sintomas articulares sugestivos da doença apresentaram concentrações significativamente reduzidas de MASP-2 (P=0,0022). Por sua vez, concentrações baixas de MBL mostraram associação com ocorrência de abortos e infecções recorrentes em pacientes com AR (P=0,0021 e P=0,0206, respectivamente). Os resultados obtidos permitem sugerir que a genotipagem dos polimorfismos de MBL2 e MASP2, bem como as concentrações séricas de MBL e MASP-2 podem representar futuras ferramentas como biomarcadores para a AR.

Abstract: Rheumatoid arthritis (RA) is an autoimmune inflammatory disease, which affects around 1% of worlds population and has a significant socio-economic impact. Mannose-binding lectin (MBL) and MBL-associated serine protease 2 (MASP-2) are proteins of the lectin pathway of the complement system and have a key-role on body's homeostasis. MBL and MASP-2 serum levels are genetically determinated by polymorphisms at the MBL2 and MASP2 gene, respectively. Polymorphisms and serum concentrations of MBL were already related to RA susceptibility and prognosis in some populations. Investigations on the role of MASP-2 on RA are absent. The present study aimed to investigate MBL and MASP-2 serum concentrations and polymorphisms in RA patients and their relatives and to relate the findings to RA clinical presentation. Two-hundred nine AR patients, 200 relatives and 421 healthy controls were studied. MBL2 polymorphisms -221 (H/L) -550 (X/Y), in the promoter, +4 (P/Q) in the 5' non-translated region and the variants A/D/B/C in the exon 1 were investigated by sequencing. Polymorphisms in the promoter (-175C>A) and exons 3 (p.R99Q, p.D120G, p.P126L), 10 (p.D371Y, p.V377A) and 12 (p.R439H), and intron 9 (+16060C>T) at the MASP2 gene were investigated by PCR sequence specific primer. MBL and MASP-2 serum concentrations were determinated by ELISA. Low MBL and MASP-2 concentrations were related to RA development (P=0,004 and P<0,0001, respectively). The haplotype LYPB was associated to higher risk for RA (OR=1,28 [CI95%1,04-1,60] P=0,018) while LXPA was more frequent in anti-CCP positive patients (OR=2,42 [CI95%1,04-5,60] P=0,036). Similarly, the MASP2 haplotypes *2A1 and *2B1 were associated with increased risk for RA (OR=6,0 [CI95%1,27-28,6] P=0,02; OR=2,2 [CI95%1,29-3,6] P=0,004, respectively). The low-producing MASP2 variants p.120G and p.439H increased in 5.13 times the risk for articular symptoms in relatives from RA patients (P=0,02). In the other hand, relatives with articular symptoms presented lower MASP-2 levels (P=0,0022). Low MBL serum concentrations were associated with miscarry and recurrent infections in RA patients (P=0,0021 and P=0,0206, respectively). In conclusion, our results lead us to suggest that MBL2 and MASP polymorphisms, as well as MBL and MASP-2 serum levels, may be future biomarkers for RA.