Organogênese indireta em Eucalyptus benthamii x Eucalyptus dunnii e transformação genética de Eucalyptus saligna e Nicotiana tabacum

Abstract

Resumo: O melhoramento das espécies vegetais via transformação genética pode ser uma alternativa para minimizar os impactos negativos causados pelo meio ambiente. O híbrido Eucalyptus benthamii x Eucalyptus dunnii é um material promissor para tolerância ao frio e à geada. Contudo, ainda não há estudos relacionados à organogênese, etapa essencial para o desenvolvimento de protocolos eficientes de transformação. Diante disto, o primeiro capítulo desta tese teve como objetivo principal estudar alguns fatores importantes para a organogênese indireta a partir de tecido foliar e para a micropropagação desse híbrido. Foram avaliados diferentes reguladores vegetais e composições salinas dos meios de cultura. No segundo capítulo foram estudados fatores que podem afetar a transformação genética de explantes cotiledonares de Eucalyptus saligna mediante co-cultura com Agrobacterium tumefaciens, como a exposição dos explantes a uma solução antioxidante, a pré-cultura dos explantes, a influência de diferentes antibióticos na regeneração de gemas e a utilização da acetosiringona nos meios de co-cultura. No terceiro capítulo foram avaliados aspectos fisiológicos, morfológicos e anatômicos de plantas de Nicotiana tabacum transformadas com o gene p5csf129a. Foram realizadas avaliações morfológicas, quantificação do conteúdo de prolina, estudo da anatomia foliar e análise da germinação de sementes T1 sob diferentes temperaturas. Em relação ao híbrido estudado, foram obtidos resultados preliminares de organogênese e multiplicação, havendo baixa regeneração indireta de gemas em explantes foliares cultivados no meio MS contendo a metade da concentração de nitratos e adicionado de 0,1 ?M ANA e 0,5 ?M TDZ. Durante o processo de transformação de cotilédones de E. saligna, a utilização da solução antioxidante foi dispensável; a pré-cultura dos explantes antes da inoculação com A. tumefaciens não melhorou a taxa de regeneração; o antibiótico Augmentin® favoreceu a organogênese em relação a cefotaxima; a concentração de canamicina interferiu na sobrevivência dos explantes mantidos em meio seletivo e apresentou efeito sobre a seleção do material transformado e, por fim, a adição da acetosiringona nos meios de co-cultura sólido e líquido teve influência positiva na eficiência da transformação dos explantes cotiledonares. Já as plantas de N. tabacum transformadas com o gene p5csf129a que apresentaram maior acúmulo de prolina, mostraram diferenças morfológicas nas folhas e flores; após a exposição à baixa temperatura, as sementes dos eventos transformados tiveram taxa de germinação superior em relação ao controle. As estruturas foliares analisadas não apresentaram diferenças qualitativas no que se refere a anatomia, porém, diferenças quantitativas foram percebidas, como o ângulo de inserção da nervura secundária com a primária diferente nas folhas das plantas com os maiores valores de prolina encontrados em comparação com o controle.