Hemoplasmas (Micoplasmas hemotrópicos) : prevalência/frequência da infecção, caracterização molecular e filogenia de hemoplasmas em cervídeos de cativeiro e vida livre do Brasil

Abstract

Resumo: Os micoplasmas hemotrópicos ou hemoplamas são parasitas epicelulares dos eritrócitos. Estas bactérias de reduzido tamanho e desprovidas de parede celular, pertecem à ordem dos Mollicutes e ao gênero Mycoplasma, baseado no sequenciamento e filogenia das sequências do gene 16S rRNA. Os organismos já foram descritos em animais domésticos, selvagens e de laboratório e até mesmo, em seres humanos. A doença segue dois cursos distintos: a doença aguda e a doença crônica. No Brasil, a infecção tem sido relatada em seres humanos, gatos, cães, porcos e animais silvestres como felídeos e capivaras de cativeiro. Espécies novas de hemoplasmas ou novos hospedeiros para os organismos foram identificadas nos estudos da infecção ao redor do mundo. Cervídeos da América do Norte e do Japão foram identificados como hospedeiros de Mycoplasma ovis e de outras duas novas espécies propostas de micoplasmas. Este trabalho propôs o estudo da infecção por hemoplasmas em cervídeos brasileiros de cativeiro e de vida livre. Esta dissertação apresenta primeiramente um capítulo de revisão sobre as características, epidemiologia e diagnóstico da infecção por hemoplasmas. Em seguida, relatam-se dois trabalhos de investigação molecular no diagnóstico de hemoplasmas, caracterização molecular e filogenia das espécies encontradas em 1) cervídeos brasileiros de cativeiro da Usina Hidrelétrica de Itaipu Binacional e em 2) cervídeos de vida livre de três regiões geográficas distintas: na Usina de Porto Primavera situada em São Paulo, nas fazendas da região do Pantanal no Mato Grosso do Sul e nas áreas do Parque Nacional das Emas em Goiás. No primeiro trabalho, 32 cervídeos (Blastocerus dichotomus, Mazama nana, M. americana) foram testados para M. ovis por meio da técnica de PCR, as amostras positivas foram sequenciadas para os genes 16S e 23S rRNA de hemoplasmas e então construiu-se a árvore filogenética comparativa a outros micoplasmas. Vinte e sete (87%) animais foram positivos, encontrando-se após o sequenciamento espécies proximamente relacionadas ao M. ovis e ao „Candidatus Mycoplasma erythrocervae. e por fim, uma nova espécie foi proposta neste trabalho, o „Candidatus Mycoplasma dichotomae.. No segundo trabalho, dos 103 cervídeos testados (B. dichotomus e O. bezoarticus), 60 (58,2%) foram positivos. Destes, foram positivos 46/64 (71,8%) animais de Porto Primavera, 10/18 (55,5%) do Pantanal e 4/21 (19%) do Parque Nacional das Emas. Dentre as amostras caracterizadas (30% dos positivos), encontraram-se as espécies relacionadas ao M. ovis, ao „Candidatus Mycoplasma erythrocervae. e ao „Candidatus Mycoplasma dichotomae.. Os resultados mostram a presença das espécies de hemoplasmas em cervídeos de diferentes regiões geográficas brasileiras em ambas as condições de habitat, cativeiro e vida livre. Os estudos reforçam a importância da investigação da infecção por hemoplasmas em animais selvagens e dos estudos de caracterização molecular para identificação de novas espécies da bactéria nestes hospedeiros.

Abstract: Hemotropic mycoplasmas or hemoplasmas are epicellular parasites of erythrocites. They are small cell-wall less bacteria that belong to the Mollicutes order and to Mycoplasma genera based on characterization and phylogeny of their 16S rRNA gene sequences. Hemoplasmas have been described infecting domestic, wild and laboratory animals and also, human beings. Acute and chronic diseases are both forms of hemoplasma infection described in many host species. Hemoplasma infection has been described in humans, cats, dogs, pigs, captive and wild animals as felids and capybaras from Brazil. Novel hemoplasma species and hosts for the bacteria have been identified around the world. North American and Japanese cervids were identified as M. ovis hosts. Besides, two proposed novel hemoplasmas species were found in these deer. Therefore, we proposed the study of hemoplasma infection in captive and free-ranging Brazilian deer. The content of this dissertation is separated in three chapters: a review chapter about features, epidemiology and diagnoses of hemoplasma infections followed by two studies on molecular investigation, diagnoses, characterization and phylogeny of hemoplasma species identified in Brazilian deer. In the second chapter, 32 captive deer (Blastocerus dichotomus, Mazama nana, M. americana) kept at Itaipu Binational Dam areas were tested. M. ovis PCR were performed and the positive samples were sequenced to 16S and 23S rRNA gene sequences. The phylogenetic trees were constructed. Twenty seven (87%) animals were positive and sequences were closely related to M. ovis and „Candidatus Mycoplasma erythrocervae.. Beside this, a novel hemoplasma species was found and proposed as „Candidatus Mycoplasma dichotomae.. The second chapter described the hemoplasma study with 103 free-ranging deer (B. dichotomus e O. bezoarticus) from 3 geographically distinct regions: Porto Primavera Dam areas (Sao Paulo), Pantanal areas (Mato Grosso do Sul) and from Emas National Park areas (Goias). Sixty (58.2%) animals were positive, including 46/64 (71.8%) from Porto Primavera, 10/18 (55.5%) from Pantanal and 4/21 (19%) from Emas National Park. Third percent of positive samples were sequenced and analyzed. The sequences were closely related to M. ovis, „Candidatus Mycoplasma erythrocervae. and „Candidatus Mycoplasma dichotomae.. Our results show the presence of hemoplasma species infecting deer from different geographic Brazilian regions under distinct habitat conditions: in wild and captivity. These studies reinforce the importance of hemoplasma investigations in wild animals and on molecular characterization to identify unknown species in those hosts. Key word: 23S rRNA gene, Brazil, „Candidatus Mycoplasma dichotomae., deer, frequency, hemoplasma, Mycoplasma ovis, prevalence.