Isolamento, cultivo e diferenciação de células tronco mesenquimais caninas

Abstract

Resumo: As celulas tronco sao celulas nao diferenciadas de embrioes, fetos ou tecidos adultos, com o potencial de gerar celulas de diversos tecidos sob o estimulo bioquimico, hormonal e mecanico adequado, in vitro ou in vivo. As celulas tronco embrionarias e fetais sao pluripotentes e as celulas tronco adultas sao multipotentes e nao especializadas. Dentre as celulas tronco adultas, as celulas tronco mesenquimais (CTMs) ja foram identificadas em diferentes orgaos e tecidos, como tecido adiposo e medula ossea. O tecido adiposo e uma fonte promissora das CTMs por sua disponibilidade e facil coleta. As CTMs tem sido utilizadas na terapia celular regenerativa, area em desenvolvimento muito pesquisada atualmente, que tem como objetivo a regeneracao de tecidos lesionados, perdidos ou com perda de funcao. O presente estudo contem uma revisao bibliografica sobre as CTMs, com destaque para o isolamento dessas celulas a partir do tecido adiposo e da medula ossea, seu cultivo, diferenciacao, caracterizacao e aplicacoes, e dois capitulos com experimentos. No primeiro capitulo esta descrito o isolamento, cultivo, estudo cinetico e diferenciacao das CTMs do tecido adiposo subcutaneo de cinco caes. Foram obtidas, em media, 146.803 celulas/g de tecido adiposo, e durante o periodo de cultivo, a cada passagem, foram obtidas em media 1,87 x 106 celulas/mL, com 99,2% de celulas viaveis a cada passagem, em media. Das cinco amostras coletadas e induzidas a diferenciacao em osteoblastos, adipocitos e condrocitos, tres se diferenciaram nos tres tipos de tecido e a diferenciacao foi avaliada pela citoquimica. No capitulo II estao descritos o estudo morfologico e morfometrico das CTMs isoladas de tecido adiposo subcutaneo de caes. Foram realizadas a descricao morfologicas das celulas em cultivo, mensuracao do comprimento da celula, da largura da celula e do diametro do nucleo e o estudo clonogenico, para avaliacao do numero de unidades formadoras de colonias fibroblasticas (UFC-F). O comprimento medio das celulas foi de 87,73 ƒÊm, a largura media foi de 21,21 ƒÊm e a media do diametro do nucleo foi de 16,35 ƒÊm. O numero medio de colonias formadas foi de 30,59 UFC-F/placa. Com base nesses resultados concluimos que o tecido adiposo subcutaneo de caes e uma fonte viavel das CTMs, as quais foram caracterizadas pela diferenciacao em osteoblastos, adipocitos e condrocitos. A caracterizacao morfologica das CTMs auxilia na identificacao dessas celulas na fase de cultivo celular.