Efeitos no metabolismo e ação imunomoduladora em camundongos do micélio de Agaricus brasiliensis produzido por cultivo no estado sólido

Abstract

Resumo: O cogumelo Agaricus brasiliensis (=Agaricus blazei, Agaricus subrufescens) possui propriedades imunoestimulantes e antitumorais. O presente trabalho teve por objetivos produzir micélio de A brasiliensis no estado sólido em grãos de trigo e avaliar o efeito da ingestão deste material sobre o metabolismo lipídico e sua ação imunomoduladora em camundongos na ausência e presença do Sarcoma-180. A biomassa, produzida por cultivo no estado sólido, mensurada por ergosterol resultou em 29% ou 0,291 g de biomassa fúngica por grama de material cultivado seco. A análise respirométrica do processo realizado em biorres do tipo colunas com aeração forçada resultou em um pico de produção de CO2 de 7,48 µmol e estimativa de velocidade de consumo de O2 de 6,22 µmol às 69 h de cultivo. O rendimento da biomassa foi determinado (YX/O) em 1,949g de biomassa por g de O2 consumido, com coeficiente de manutenção de biomassa (mx) de 0,0027 g de O2 consumido por g de biomassa produzida por h. A produção máxima de biomassa estimada ocorreu às 242 horas de cultivo com X de 24,081 g.100g-1, com velocidade de crescimento específica (µ) de 0,087 h-1; e em 18 h de cultivo o µmáx alcançou o valor de 0,162 h-1. A ração formulada com o trigo cultivado foi testada in vivo em camundongos divididos em grupos denominados A100, A50 e A10, com as respectivas dosagens de 29%, 14,5% e 2,9% de micélio de A. brasiliensis. Metade dos animais de cada grupo foi inoculada com Sarcoma 180 e a outra parte com solução salina. O peso dos animais, as análises de urina e de fezes, ingestão de água não apresentaram alterações importantes entre os grupos A100 e A50. Importantes alterações ocorreram no metabolismo lipídico dos camundongos normais dos grupos A100 e A50, com redução nos lipídeos totais e colesterol total, e decréscimos de 14% e 36% para triacilgliceróis e aumentos de 61% e 115% para a concentração de HDL-colesterol plasmáticos, respectivamente. Estes dados representaram uma redução de 48% e 70% na relação triacilgliceróis: HDLcolesterol plasmático e decréscimo de 65% e 96% no índice aterogênico dos animais dos grupos A100 e A50, respectivamente. O grupo A10 apresentou aumento de 13% nos valores do HDL-colesterol e redução de 53% no índice aterogênico. Na presença do Sarcoma-180, nos grupos A100 e A50 foi constatado efeito redutor para lipídeos totais, e redução de 35% e 27% para os triacilgliceróis e de 34% e 25% para o VLDL colesterol, respectivamente. A análise por citometria de fluxo de células esplênicas e dos linfócitos dos linfonodos axilares resultou em efeito estimulante sobre o sistema imunológico, com aumento da população de células B (CD19+) e células NK (CD16:32+) para os grupos A100 e A50. Foi detectada a produção de TNF-a e redução de células T helper - Th (CD4+) e de células citotóxicas ativadas (CD8:25+) nos linfócitos dos linfonodos axilares dos grupos A100 e A50. Para o grupo A10 não foi observado efeito de estímulo ou supressão sobre as células Th, T citotóxicas (CD8+), B e NK, mas foi detectado aumento na concentração plasmática de IL-6 e IFN-?. Na presença do Sarcoma-180, nos grupos A100 e A10, detectou-se aumento de células B e Th dos linfócitos dos linfonodos e aumento das células NK e T citotóxicas esplênicas. Nos animais inoculados com tumor do grupo A100 foi observado redução de TNF-a e produção de IL-6. No grupo A10 na presença do tumor, observou-se redução na produção de óxido nítrico e de ânion superóxido por macrófagos peritoneais. A dieta com o cogumelo resultou em uma redução tumoral de 8,1% e 46,25% para os grupos A100 e A10, respectivamente. No grupo A50 foi detectado aumento de células Th, T citotóxicas do baço e dos linfonodos, com redução de células B e NK, redução de TNF-a e produção de IFN-?, que resultou em redução tumoral de 55,23%.

Abstract: The mushroom Agaricus brasiliensis (=Agaricus blazei, Agaricus subrufescens) has immunostimulant and antitumoral properties. The present work aimed at producing the mycelia of A brasiliensis on wheat grains by solid state cultivation and evaluating the effect of the ingestion of this cultivated material on the lipidic metabolism and on the immunomodulatory activity in mice, with and without Sarcoma-180. The biomass was produced by solid state cultivation and measured by ergosterol which resulted in 29% or 0.291 g fungi biomass per g of dry cultivated material. The respirometric analyses of the cultivation in column with forced aeration resulted in a peak of CO2 production of 7.48 µmol.h-1 and uptake velocity estimation of O2 of 6.22 µmol.h-1 at 69 h of cultivation. The biomass yield (YX/O) resulted in 1.949g of biomass per g of consumed O2, with a biomass manutention coefficient (mx) of 0.0027 g of consumed O2 per g of produced biomass per hour. The maximum production of estimated biomass occurred at 242 h of cultivation with X of 24.081 g.100 g-1, and with specific growth velocity (µ) of 0.087 h-1; at 18 h of cultive the µmax reached the value of 0.1617 h-1. The chow formulated with the cultivated wheat was tested in vivo in mice divided in groups nominated A100, A50 and A10, with the respective dosages of 29%, 14.5% and 2.9% of mycelia of A. brasiliensis. Half of the animals of each group were inoculated with Sarcoma 180 and the other part with saline solution. The corporal weight, water ingestion, urine and faeces analysis did not present important alteration for A100 and A50 groups. It was noticed significant alterations in the lipidic metabolism of mice from A100 and A50 groups, with reduction in total lipids and total cholesterol, decreases of 14% and 36% for triacylglycerides and increases of 61% and 115% for serum HDL-cholesterol concentration, respectively. These data represented a reduction of 48% and 70% in the triacylglycerides: HDL-cholesterol plasmatic ratio and also a decrease of 65% and 96% in the atherogenic index of the animals from the groups A100 and A50, respectively. In the group A10 it was observed an increase of 13% in HDL-cholesterol values and reduction of 53% in the atherogenic index. In the presence of Sarcoma-180, in the groups A100 and A50 it was detected a reduction in total lipids, as well as a decrease of 35% and 27% of triacylglycerides and 34% and 25% of VLDLcholesterol, respectively. The flow cytometric analysis of splenic cells and lymphocytes from axilar lymphonodes resulted in a stimulant effect on the immune system, with increase of the B cells (CD19+) and NK cells (CD16:32+) in the groups A100 and A50. It was detected the production of TNF-a, reduction of T helper cells - Th (CD4+) and activated cytotoxic cells (CD8:25+) in the axilar lymphonodes of the A100 and A50 groups In the A10 group, it was not observed stimmulatory or supressed effect on Th, T cytotoxic (CD8+), B and NK cells; however, it was detected an increase in the plasmatic concentration of IL-6 and IFN-?. In the presence of the Sarcoma-180, in the groups A100 and A50, it was detected increase in the B and Th cells of the lymphocytes from the lymphonodes and increase in the NK and T cytotoxic splenic cells. In the animals from group A100 inoculated with the tumor it was observed reduction of TNF-a and production of IL-6. In the A10 group, in the presence of the tumor, it was observed a reduction in the production of nitric oxide and superoxide anion by peritoneal macrophages. The diet with the mushroom resulted in a tumoral reduction of 8.1% and 46.25% for the groups A100 and A10, respectively. In the group A50 it was detected an increase of Th and T cytotoxic cells in the spleen and in the lymphonodes, with reduction of B and NK cells, reduction of TNF-a and production of IFN-?, which resulted in tumoral inhibition of 55.23%.