Produção e caracterização de anticorpos monoclonais anti fragmento Fc de IgG de bovino

Abstract

Resumo: Anticorpos monoclonais (AcMc) anti imunoglobulina G (IgG) bovina foram produzidos e caracterizados. De um total de sete hibridomas obtidos, dois foram escolhidos com base na absorvância obtida por ELISA, a partir do meio de cultura, e foram designados B4F11 e B3H12. Estes monoclonais foram analisados por Western Blot, para fragmentos de IgG obtidos por proteólise com papaína, revelando que o B4F11, possivelmente, dirigia-se a um antígeno conformacional e que B3H12 reagia especificamente com Fc (fragmento cristalizável) de IgG bovino. Este Anticorpo Monoclonal (B3H12) anti Fc de IgG bovino foi utilizado para a produção de conjugados com isotiocianato de fluoresceína e peroxidase. Ambos os conjugados poderão ser empregados em imunofluorescência indireta e ELISA indireto respectivamente. Estes reagentes foram avaliados em testes de imunofluorescência indireta para pesquisa de anticorpos dirigidos à Brucella abortus, Metacestódeo de Taenia saginata (Cisticercose Bovina) e Herpesvírus Bovino 1, com resultados compatíveis à padronização do teste. Quanto ao conjugado para ELISA, quando avaliado revelou-se específico, mas com título que precisa ser melhorado.

Abstract: Monoclonal antibodies directed to bovine IgG, were produced and characterised. From a total of seven hybridomas with a good performance, two of them were chosen, taking in account the optical density evaluated on ELISA test, where culture medium was the start material, they where designated B4F11 and B3H12. These monoclonals were probed in a Western Blot to detect IgG fragments originated by papain proteolises, making known that B4H11 reacted with a conformational epitope, while B3H12 interacted in specific manner with the Fc (cristalizable fragment) from bovine IgG. These monoclonal (B3H12) anti Fc was utilizaded in a conjugation procedure with fluorescein isothyocianate and peroxidase in order to develop indirect immunoflorescence and ELISA, respectively. This reagents were evaluated performing indirect immunofluorescence and ELISA, in order to detect antibodies to Brucella abortus, Taenia saginata metacestodeo (Bovine Cysticercosis) and Bovine Herpesvirus 1. The results were in accordance to the test standards. The ELISA conjugate revelead good performance, besides the low titers.