Efeito da mutação das cisteínas nas posições 414, 426, 446 e 451 da proteína NifA de Herbaspirillum seropedicae

Abstract

A proteína NifA de Herbaspirillum seropedicae é a ativadora de transcrição dos genes nif, cujos produtos compõem e montam o complexo enzimático da nitrogenase. Dessa forma, a proteína NifA tem papel central na regulação de fixação de nitrogênio em H. seropedicae. A atividade da proteína NifA é regulada pelos níveis de oxigênio e nitrogênio fixado. O mecanismo de modulação da atividade da proteína por esses sinais ambientais ainda não está claro. A sensibilidade da proteína NifA de H. seropedicae ao oxigênio provavelmente está relacionada com um motivo de 4 cisteínas, localizado no final do motivo central e na região interdomínios dessa proteína. Possivelmente esse motivo forma um cluster metálico, que pode regular a atividade da proteína em resposta ao nível redox do ambiente. Nesse trabalho o motivo conservado de cisteínas foi mutagenizado e a atividade das proteínas mutantes foi testada in vivo. Os resultados sugerem que de fato esse motivo é essencial para a atividade da proteína, indicando que parece exercer um papel importante no processo de ativação da transcrição.

The NifA protein of Herbaspirillum seropedicae is responsible to activate the transcription of nif genes, whose products mount the enzymatic complex of nitrogenase. Thus, the NifA protein has a central role on the regulation of nitrogen fixation. The levels of oxygen and fixed nitrogen regulate the activity of NifA protein. The way how the NifA protein activity is modulated by these environmental signals is not clear. The sensibility of H. seropedicae NifA protein to oxygen probably is related to a four cysteines motif, located in the final of Central domain and interdomains region. Possibly this motif forms a metallic cluster that can regulate the protein activity in response to redox level of environment. In these work, the conserved cysteine motif were mutagenised and the activity of mutant proteins were assayed in vivo. The results suggest that these motif is essential to protein activity, indicating that these cystein motif seems to be important in transcription activation.