Efeitos de diferentes níveis de nitrito sobre o exoesqueleto do Camarão-da-Amazônia (Macrobrachium amazonicum, Heller, 1862) e técnica de necropsia em camarões

Abstract

Resumo: Primeiro artigo: A crescente demanda e busca pela otimização da cadeia produtiva nacarcinicultura tem apresentado novos desafios, como o incremento dos níveis de compostosnitrogenados no sistema de produção. Dentre os compostos nitrogenados, o nitrito tem sidoobjeto de estudo, uma vez que é correlacionado a mortalidade e toxicidade em diferentesespécies de camarões e fases de desenvolvimento. Nesse trabalho foram avaliados os efeitosde quatro concentrações de nitrito sobre a espessura, composição e superfície doexoesqueleto de espécimes juvenis de camarão-da-amazônia (Macrobrachium amazonicum,Heller, 1862). Foram usados 430, sendo 400 espécimes, distribuídos em grupo controle (GC),grupo com metade do nível de segurança (MNS) (0,1 mg/L), grupo nível de segurança (NSR)(0,2 mg/L) e grupo dobro do nível de segurança (DNS) (0,4 mg/L). O experimento teveduração de 15 dias e ao longo do experimento os animais foram coletados e agrupados no dia5, 10 e 15. Os animais foram eutanasiados por termonarcose e secção do cordão nervosoventral e seccionados na membrana intersegmentar entre o 1º e o 2º somito abdominal, sendoa porção cranial destinada a avaliação por microscopia de luz e a caudal a microscopiaeletrônica de varredura (MEV) e espectroscopia de raios X com dispersão de energia (EDS).Dos 400 espécimes submetidos ao experimento apenas 305 que estavam em condições paraavaliação histológica em microscópio de luz. Para as avaliações de varredura e EDS foramescolhidos aleatoriamente quatro espécimes de cada grupo amostral, agrupados nos dias 5,10 e 15. As imagens obtidas pelo MEV foram avaliadas e ranqueadas de acordo com a lesão,distribuição e intensidade. Os valores obtidos na avaliação histológica, EDS e MEV foramcomparados pelo Teste de Tukey. Os valores obtidos para espessura do conjuntoexocutícula/epicutícula e endoderme não apresentaram variação estatística. Os valores paraespessura da camada epidérmica no grupo controle apresentaram diferença estatística entreo D0, D5, D10 e D15. No D0 a epiderme apresentou menor espessura, seguida por ápice deespessamento (D5) com redução gradativa em D10 e D15. O grupo MNS apresentouespessamento gradual da epiderme do D0 até D10, seguido de manutenção da espessura atéD15. O mesmo comportamento foi evidenciado na epiderme no grupo NNS. No grupo DNSa epiderme apresentou menor espessura no D0, seguida de aumento e manutenção daespessura ao longo de D5, D10 e D15. Nos valores obtidos para espessura total doexoesqueleto, foram evidenciadas diferenças estatísticas, dentro do grupo controle, aodecorrer do tempo. Houve espessamento do exoesqueleto entre o D0 e os demais dias,contudo, apesar da diferença ser evidente entre D0 e D5, D10 e D15, não houve diferençaestatística entre os valores obtidos entre D10 e D15. No tratamento MNS os valoresencontrados para espessura total do exoesqueleto apresentaram diferença estatística entre D0e D5, D10 e D15. Contudo não houve diferença estatística entre a espessura mensurada noD5 e D15, apenas entre esses dois e D10. O que reflete em aumento da espessura iniciandoem D5 até D10, com redução de espessura em D15. O mesmo comportamento foievidenciado no grupo MNS. Já no grupo DNS o valor de espessura foi estatisticamente menorentre o D0 e dos demais dias, contudo não houve diferença entre D5, D10 e D15. Na avaliaçãoda epiderme, em relação a avaliação entre tratamentos em um mesmo período em D5 e D10não houve diferenças estatísticas entre os grupos. Em D15 o grupo controle e o grupo MNS(0,1mg) foram iguais entre si e diferentes dos grupos NSR (0,2 mg) e DNS (0,4 mg), que emcontrapartida não apresentaram diferença entre si. Na avaliação de EDS o único elementoque mostrou diferença estatística entre os tratamentos foi o Cálcio em D15, em que o valorfoi maior em NSR e divergiu estatisticamente do valor obtido em MNS, contudo não houve8diferença entre os demais grupos. Foi observado que as lesões de superfície do exoesqueleto,avaliadas via MEV, são gradativamente mais complexas com o nível de nitrito e tempo deexposição.Palavras-chave: compostos nitrogenados; cutícula; histologia; EDS; MEV; invertebrados.Segundo artigo: A produção de crustáceos é uma importante atividade aquícola no Brasil eno mundo, contribuindo para manutenção da segurança alimentar de diversos grupospopulacionais. Diagnosticar com celeridade e precisão doenças emergentes e reemergentesassumem um verdadeiro desafio à produção de camarões. O diagnóstico definitivo dasenfermidades pode ser realizado pelo emprego de diversas técnicas, contudo, como passoinicial tem-se a identificação de lesões macroscópicas e a coleta de amostras para testagem.A padronização de uma técnica de necropsia para camarões é necessária, dessa formaobjetivamos estabelecer um roteiro de necropsia que possa ser empregado de forma ordenadae sistemática. Foram usados oito espécimes adultos de Camarão-da-Malásia(Macrobrachium rosenbergii, De Man, 1879), seis fêmeas e dois machos, com peso médiode 41 g (± 15 g) e comprimento total médio de 14,38 cm (± 1,64 cm). Os animais forameutanasiados com emprego de eugenol (100 mg/L) e cloreto de potássio (100 mg/100 g depeso vivo), contudo, antes da eutanásia, foram submetidos a coleta de hemolinfa pela punçãodo seio hemolinfático ventral. Os espécimes foram avaliados externamente e em segundomomento foram seccionados em uma porção de cefalotórax e abdômen, cada qual submetidaa incisão dorsal em linha média e exposição dos componentes anatômicos, como intestino,coração, gônadas, estômago, hepatopâncreas e tecidos nervosos. Dos oito espécimesavaliados três apresentaram alterações, sendo elas ausência de apêndices, áreas de erosões,melanização e redução da dureza no exoesqueleto. A técnica descrita pelos autorespossibilitou a avaliação dos principais órgãos desses animais e pode ser empregada às demaisespécies de camarões, respeitando variações anatômicas e sítio lesivos.

Abstract: Frist paper: The growing demand for and search for optimization in the shrimp farmingproduction chain have presented new challenges, such as the increase in the levels of nitrogencompounds in the production system. Among these nitrogen compounds, nitrite has been thesubject of study due to its correlation with mortality and toxicity in different species of shrimpat various developmental stages. This study aimed to evaluate the effects of four nitriteconcentrations on the thickness, composition, and surface of the exoskeleton in juvenilespecimens of Amazon shrimp (Macrobrachium amazonicum, Heller, 1862). A total of 430specimens were used, of which 400 were distributed into four groups: a control group (CG),a half-safety level group (MNS) (0.1 mg/L), a safety level group (NSR) (0.2 mg/L), and adouble-safety level group (DNS) (0.4 mg/L). The experiment lasted 15 days, and the animalswere collected and grouped on days 5, 10, and 15. The animals were euthanized throughthermonarcosis and by sectioning the ventral nerve cord. The specimens were then cut in theintersegmental membrane between the 1st and 2nd abdominal somite, with the cranial portiondesignated for evaluation by light microscopy and the caudal portion for scanning electronmicroscopy (SEM) and energy dispersive X-ray spectroscopy (EDS). Of the 400 specimenssubmitted to the experiment, only 305 were suitable for histological evaluation under a lightmicroscope. For scanning and EDS evaluations, four specimens were randomly selected fromeach sample group on days 5, 10, and 15. The images obtained by SEM were evaluated andranked according to the lesions, distribution, and intensity. The values obtained fromhistological evaluations, EDS, and SEM were compared using the Tukey test. The values forthe thickness of the exocuticle/epicuticle and endodermis showed no statistical variation. Thevalues for the thickness of the epidermal layer in the control group demonstrated a statisticaldifference between D0, D5, D10, and D15. On D0, the epidermis was thinner, followed by athickening peak at D5, with a gradual reduction at D10 and D15. The MNS group exhibitedgradual thickening of the epidermis from D0 to D10, followed by a maintenance of thicknessuntil D15. The same behavior was observed in the epidermis of the NSR group. In the DNSgroup, the epidermis showed a thinner thickness on D0, followed by an increase andmaintenance of thickness throughout D5, D10, and D15. Statistical differences in the totalthickness of the exoskeleton were evident within the control group over time. Theexoskeleton thickened between D0 and the other days; however, while the difference wassignificant between D0 and D5, D10, and D15, no statistical difference was observedbetween D10 and D15. In the MNS treatment, the values for the total thickness of theexoskeleton showed a statistical difference between D0 and D5, D10, and D15. However, nostatistical difference was found between the thickness measured on D5 and D15, but therewas a difference between D5 and D10. This reflected an increase in thickness from D5 toD10, followed by a reduction in thickness at D15. The same behavior was observed in theNSR group. In the DNS group, the thickness was statistically lower on D0 compared to theother days; however, no differences were found between D5, D10, and D15. Regarding theepidermis evaluation, no statistical differences were observed between treatments at the sametime points on D5 and D10. On D15, the control group and the MNS group (0.1 mg/L) weresimilar to each other and differed from the NSR (0.2 mg/L) and DNS (0.4 mg/L) groups,which, in turn, did not show any differences between them. In the EDS evaluation, the onlyelement that showed a statistical difference between treatments was calcium on D15, wherethe value was higher in the NSR group, differing significantly from the MNS value. Nodifferences were found between the other groups. Surface lesions of the exoskeleton,10evaluated by SEM, were observed to become progressively more complex with increasingnitrite levels and exposure time.Keywords: nitrogenous compounds; cuticle; histology; EDS; MEV; invertebrates.Second paper: The production of crustaceans is an important aquaculture activity in Braziland worldwide, contributing to the maintenance of food security for various populationgroups. Diagnosing emerging and reemerging diseases swiftly and accurately poses asignificant challenge to shrimp production. Definitive diagnosis of diseases can be achievedthrough various techniques; however, the initial step involves identifying macroscopiclesions and collecting samples for testing. Standardizing a necropsy technique for shrimp isnecessary; thus, we aim to establish a necropsy protocol that can be employed in an orderlyand systematic manner. Eight adult specimens of Malaysian shrimp (Macrobrachiumrosenbergii, De Man, 1879) were used, consisting of six females and two males, with anaverage weight of 41 g (± 15 g) and an average total length of 14.38 cm (± 1.64 cm). Theanimals were euthanized using eugenol (100 mg/L) and potassium chloride (100 mg/100grams of body weight); however, prior to euthanasia, hemolymph was collected bypuncturing the ventral hemolymphatic sinus. The specimens were externally examined andthen sectioned into cephalothorax and abdomen, each subjected to a dorsal incision along themidline to expose anatomical components such as the intestine, heart, gonads, stomach,hepatopancreas, and nervous tissues. Of the eight specimens evaluated, three showedalterations, including the absence of appendages, areas of erosion, melanization, and reducedhardness of the exoskeleton. The technique described by the authors enabled the evaluationof the main organs of these animals and can be applied to other shrimp species, taking intoaccount anatomical variations and lesion sites.