Efeitos antineoplásicos de extratos de Pereskia grandifolia (ora-pronobis) em modelos pré-clínicos de câncer de mama

Abstract

Resumo: O câncer de mama é a neoplasia maligna mais incidente entre mulheres em todo o mundo, representando um desafio terapêutico relevante, especialmente nos subtipos hormônio-receptor positivos, nos quais a resistência tumoral e a toxicidade dos quimioterápicos convencionais limitam a eficácia clínica. Nesse contexto, a busca por terapias alternativas mais seguras tem impulsionado o interesse por produtos naturais. Pereskia grandifolia Haw. (Cactaceae), conhecida como ora-pronóbis, apresenta elevado valor nutricional e propriedades biológicas já descritas. Este estudo avaliou a atividade antitumoral e os mecanismos moleculares das frações hidroetanólica (HD) e hexânica (HX) obtidas das folhas de P. grandifolia, integrando análises in vitro em células MCF-7 e in vivo em modelos murinos de carcinoma de Ehrlich (formas sólida e ascítica). A caracterização fitoquímica revelou que a fração HX é predominantemente composta por triterpenos e esteroides, enquanto a fração HD apresentou um perfil químico mais complexo. Em ensaios in vitro, a fração HX exibiu citotoxicidade acentuada em células MCF-7, enquanto a fração HD demonstrou efeito antiproliferativo mais pronunciado, sendo ambas capazes de abolir a sobrevivência clonogênica. Para a validação in vivo, camundongos fêmeas Swiss inoculados com células de Ehrlich foram tratados por via oral durante 21 dias com HD (100 mg·kg¹), HX (50 mg·kg¹) ou veículo. Ambas as frações inibiram significativamente a progressão do carcinoma sólido de Ehrlich (86% para HD e 89% para HX), sem efeito no modelo ascítico, indicando uma resposta dependente do microambiente tumoral. As análises moleculares por RTqPCR demonstraram que ambas as frações induziram morte celular programada por necroptose, evidenciada pela modulação de Ripk1, Ripk3 e Casp8, além da inibição da angiogênese, indicada pela redução da expressão de Vegf. Contudo, os mecanismos antitumorais diferiram entre as frações. A fração HD promoveu uma resposta mais modulada, associada à redução da necrose tumoral, menor infiltração inflamatória e diminuição sistêmica de granulócitos e monócitos circulantes. Em contraste, a fração HX atuou predominantemente como agente citotóxico, induzindo estresse oxidativo, caracterizado pelo aumento de espécies reativas de oxigênio e glutationa reduzida, elevado grau de necrose tumoral, supressão de genes relacionados à inflamação (Nfkb1), hipóxia (Hif1a) e ciclo celular (Ccnd1), além de linfocitose sistêmica. Em conjunto, os resultados demonstram que as frações hidroetanólica e hexânica de P. grandifolia apresentam atividade antitumoral relevante em modelos pré-clínicos de câncer de mama sólido, mediada por mecanismos moleculares distintos e complementares. A convergência na indução de necroptose, na inibição da angiogênese e a ausência de toxicidade sistêmica reforçam o potencial da espécie como fonte de compostos bioativos para o desenvolvimento de estratégias terapêuticas antineoplásicas adjuvantes ou alternativas

Abstract: Breast cancer is the most prevalent malignant neoplasm among women worldwide, representing a significant therapeutic challenge, particularly in hormone receptor–positive subtypes, in which tumor resistance and the toxicity associated with conventional chemotherapeutic agents limit clinical efficacy. In this context, the search for safer alternative therapies has driven growing interest in natural products. Pereskia grandifolia Haw. (Cactaceae), commonly known as ora-pro-nóbis, exhibits high nutritional value and well-documented biological properties. This study evaluated the antitumor activity and molecular mechanisms of hydroethanolic (HD) and hexane (HX) fractions obtained from P. grandifolia leaves, integrating in vitro analyses using MCF-7 cells and in vivo assays in murine models of Ehrlich carcinoma (solid and ascitic forms). Phytochemical characterization revealed that the HX fraction is predominantly composed of triterpenes and steroids, whereas the HD fraction exhibited a more complex chemical profile. In vitro assays demonstrated that the HX fraction exerted pronounced cytotoxicity in MCF-7 cells, while the HD fraction showed a more marked antiproliferative effect; both fractions were able to abolish clonogenic survival. For in vivo validation, female Swiss mice inoculated with Ehrlich tumor cells were orally treated for 21 days with HD (100 mg·kg¹), HX (50 mg·kg¹), or vehicle. Both fractions significantly inhibited the progression of solid Ehrlich carcinoma (86% for HD and 89% for HX), with no effect observed in the ascitic model, indicating a tumor microenvironment–dependent response. Molecular analyses by RT-qPCR demonstrated that both fractions induced programmed cell death via necroptosis, as evidenced by the modulation of Ripk1, Ripk3, and Casp8, in addition to the inhibition of angiogenesis, indicated by reduced Vegf expression. However, distinct antitumor mechanisms were observed between the fractions. The HD fraction promoted a more modulated response, associated with reduced tumor necrosis, lower inflammatory infiltration, and a systemic decrease in circulating granulocytes and monocytes. In contrast, the HX fraction acted predominantly as a cytotoxic agent, inducing oxidative stress characterized by increased reactive oxygen species and reduced glutathione levels, extensive tumor necrosis, suppression of genes related to inflammation (Nfkb1), hypoxia (Hif1a), and cell cycle regulation (Ccnd1), as well as systemic lymphocytosis. Collectively, these findings demonstrate that the hydroethanolic and hexane fractions of P. grandifolia exhibit relevant antitumor activity in preclinical models of solid breast cancer, mediated by distinct and complementary molecular mechanisms. The convergence in necroptosis induction and angiogenesis inhibition, together with the absence of systemic toxicity, reinforces the potential of this species as a source of bioactive compounds for the development of adjuvant or alternative antineoplastic therapeutic strategies