O papel do miR 1257 no câncer de mama

Abstract

Resumo: O câncer de mama é a neoplasia mais frequentemente diagnosticada em mulheres e a principal causa de morte por câncer em mulheres. Aproximadamente 90% das variantes genéticas associadas ao câncer de mama estão localizadas em regiões não codificadoras, incluindo sequências alvo de microRNAs (miRNAs). Polimorfismos de único nucleotídeo (SNPs) localizados na região 3'UTR de alvos de miRNAs podem interferir com o seu sítio de ligação, reduzindo sua efetividade ou abolindo a repressão mediada pelo miRNA. Entre as predições obtidas previamente no trabalho in silico, foi verificada que a região 3’UTR do gene MDM4 é alvo de interação com microRNAs através de miRSNPs. Por ser um regulador negativo da atividade de transativação da proteína supressora tumoral p53, MDM4 assim como seu homólogo estrutural, MDM2 exercem um importante papel pró-oncogênico em várias neoplasias, dentre elas o câncer de mama. Dessa forma, os objetivos do presente trabalho foram investigar o papel do miR-1257, na interação com o seu alvo predito miRSNP rs10900596 T>C localizado em 3’UTR de MDM4, bem como avaliar os efeitos da radiação UV e da superexpressão do miR-1257 na expressão relativa dos genes MDM2, MDM4 e suas isoformas, além de verificar quais parâmetros de malignidade nas linhagens tumorais de mama ZR-75-1 e MDA-MB-231 podem ser modificados pela ação do miR-1257. A análise de interação empregando o sistema repórter luciferase demonstrou que o miR-1257 interage com a região alvo contendo o alelo C do rs10900596 de MDM4 (p= 0,0175) preconizada pelo estudo de bioinformática mas essa ligação não é afetada pela variação alélica do miRSNP presente nesse sítio de ligação. O miR-1257 também possui sítios de ligação em 3’UTR de MDM2. Os resultados obtidos mostraram que o miR1257 afeta a expressão relativa de MDM2 na linhagem ZR-75-1. A radiação ultravioleta aumentou a expressão relativa da isoforma MDM4-211 na linhagem ZR-75-1, que sem o efeito genotóxico não apresentava essa isoforma. Observou-se um efeito sinérgico da combinação do miR-1257 e da UV na expressão das isoformas de MDM4, especialmente da isoforma MDM4-FL nas linhagens tumorais de mama contrastantes ZR-75-1 e MDA-MB-231. O miR1257 apresenta um efeito supressor tumoral no câncer de mama, uma vez que essa molécula foi capaz de reduzir a viabilidade celular, aumentar as taxas de morte celular e interferir negativamente na proliferação de células de linhagens de câncer de mama distintas

Abstract: Breast cancer is the most frequently diagnosed neoplasm in women and the leading cause of cancer death in women. Approximately 90% of the genetic variants associated with breast cancer are located in non-coding regions, including target sequences of microRNAs (miRNAs). Single nucleotide polymorphisms (SNPs) located in the 3'UTR region of miRNA targets can interfere with their binding site, reducing their effectiveness or abolishing miRNAmediated repression. Among the predictions obtained previously in the in silico study, it was verified that the 3'UTR region of the MDM4 gene is the target of interaction with microRNAs through miRSNPs. As a negative regulator of the transactivation activity of the tumor suppressor protein p53, MDM4, as well as its structural homologue MDM2, plays an important pro-oncogenic role in several neoplasms, including breast cancer. Thus, the objectives of the present study were to investigate the role of miR-1257 in the interaction with its predicted target miRSNP rs10900596 T>C located in 3'UTR of MDM4, as well as to evaluate the effects of UV radiation and overexpression of miR-1257 in the relative expression of the genes MDM2, MDM4 and their isoforms, in addition to verifying which parameters of malignancy in the breast tumor lines ZR-75-1 and MDA-MB-231 can be modified by the action of this miRNA. The interaction analysis using the luciferase reporter system showed that miR-1257 interacts with the target region containing the C allele of MDM4 rs10900596 (p=0.0175) predicted by the bioinformatics study, but this binding is not affected by the allelic variation of the miRSNP present at this binding site. miR-1257 also has binding sites on the 3'UTR of MDM2. The results obtained showed that miR-1257 affects the relative expression of MDM2 in the ZR-75-1 cell line. Ultraviolet radiation increased the relative expression of the MDM4-211 isoform in the ZR-75-1 cell line, which, without the genotoxic effect, did not present this isoform. A synergistic effect of the combination of miR-1257 and UV was observed on the expression of MDM4 isoforms, especially the MDM4-FL isoform in the contrasting breast tumor lines ZR-75-1 and MDA-MB-231. miR-1257 has a tumor suppressor effect on breast cancer, since this molecule was able to reduce cell viability, increase cell death rates and negatively interfere with the proliferation of cells from different breast cancer lineages