Identificaçao e caracterizaçao de TcNUP-1, uma proteína de lâmina nuclear em Trypanosoma cruzi
Resumo
A lâmina nuclear é uma estrutura fibrilar protéica que está abaixo da membrana nuclear interna. Nos metazoários, as laminas são os componentes estruturais principais dessa estrutura e estão envolvidas em diversos processos nucleares. Os eucariotos que não possuem
laminas apresentam proteínas distintas com funções homólogas. Recentemente foi identificada uma proteína com domínio coiled-coil em Trypanosoma brucei, NUP-1, como o componente filamentoso principal da lâmina nuclear. Entretanto, seu papel exato ainda não
foi definido. Com a intenção de sugerir funções para a lâmina nuclear em tripanossomatídeos, nós caracterizamos uma proteína ortóloga à NUP-1 em Trypanosoma cruzi. A TcNUP-1 é uma proteína com alta massa molecular e domínios coiled-coil e que está localizada na
periferia nuclear. Utilizando ensaio de imunoprecipitação de cromatina, nós identificamos alguns de seus sítios de ligação com o DNA. Após a análise das seqüências encontradas, pudemos observar uma associação clara com fragmentos de DNA contendo genes e pseudogenes da família das trans-sialidases, membros da família da proteína gp85 e seqüências relacionadas à SIRE, que estão comumente associadas às regiões subteloméricas dos cromossomos do T. cruzi. Baseados nos nossos resultados, nós sugerimos que TcNUP-1 é uma proteína estrutural responsável por ancorar as extremidades dos cromossomos ao envelope nuclear e que, portanto, apresenta um papel essencial na organização nuclear do T. cruzi The nuclear lamina is a structure lining the inner nuclear membrane. In metazoans,
lamins are the primary structural components of nuclear lamina and are involved in several
processes. Eukaryotes lacking lamins present distinct proteins with homologous functions.
Recently it was identified a coiled-coil protein in Trypanosoma brucei, NUP-1, as the major
filamentous component of its nuclear lamina. However, its precise role has not been defined.
To shed light to this question, we characterized a homologous protein in Trypanosoma cruzi,
TcNUP-1 and identified some of its in vivo DNA binding sites using chromatin
immunoprecipitation assay (ChIP). We found a clear association of the TcNUP-1 with DNA
sequences containing (pseudo)genes from the ts (trans- sialidase)-like family, members of
gp85 gene family and sequences related to SIRE (short interspersed repetitive element), which
are commonly associated to the subtelomeric region of the T. cruzi chromosomes. Based on
our results, we suggest that TcNUP-1 is a structural protein having an essential role in nuclear
organization by anchoring the ends of the T. cruzi chromosomes to the nuclear envelope.
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